郑州大学第一附属医院肝胆外科（郑州450052） 范正军 彭 飞 薛建峰 程 波 刘艳杰

目前国内外对原发性肝癌（PLC）的发病机制的研究涉及多发面、多层次的内容，从分子生物学水平来说，其发生、发展、侵袭和转移与多基因突变、细胞信号转导通路和异常新生血管增生等密切相关。已有学者研究指出肝肠钙粘连蛋白（LI－cadherin）与肝癌细胞的生长、转移和侵袭性相关，但具体机制尚未阐明［1］，本文应用si RNA干扰技术下调人肝细胞肝癌细胞株Hep3B中 LI－cadherin的表达，研究 LI－cadherin对人肝癌细胞增值的影响，并初步探讨其机制。

材料与方法

1 材 料 Hep3B人肝癌细胞株购自于上海汉博生物科技有限公司，脂质体Lipofectamine T M，2000、TRIzol试剂盒购自于美国Invitr ogen公司，氨苄青霉素、RPMI1640培养基、溴化乙锭（EB）、胰酶细胞消化液、DNA Ladder Mar ker购自于大连宝生物工程有限公司，胶回收试剂盒、10%胎牛血清（FBS）、G418购自于GIBCO公司，低熔点琼脂糖粉购自于英国Oxoid公司，LI－cadherin Si RNA（sc－43014）、Contr ol Si RNA（sc－37007）、Wester n blotting 检测试剂盒购自于美国Santa公司，二甲基亚砜（DMSO）、四甲基偶氮哇盐（MTT）购自于美国Sig ma公司，蛋白提取试剂盒、蛋白提取缓冲液购自于北京天恩泽基因科技有限公司。LB培养基、RPMI－1640细胞培养液、50×（Tris－AC）电泳缓冲液（TAE）、琼脂糖电泳凝胶、100μg/ml氨苄青霉素、MTT溶液、PI染液、0．25%胰蛋白酶消化液、Transfer buffer for wester n bl otting（1000 ml），所有实验试剂均严格按照说明书仔细配置。

2 方 法 ①细胞培养及LI－cadherin转染：将Hep3B细胞于37℃含10%PBS的培养液中解冻，加入10 ml RPM－1640培养液制成细胞悬液，于37℃含5%CO2孵箱培养、10 ml含10%胎牛血清但不含抗生素的培养液培养，胰蛋白酶液消化传代，取对数生长期细胞为实验对象。si RNAs转染用 Lipofectamine T M2000脂质体并严格按照操作说明书的转染条件及步骤进行细胞基因转染，72h后收获细胞进行检测和实验。……