赵培莉，吴静明，张 毅，韩晓燕，吴丽平

防腐剂是能够抑制微生物的生长和繁殖，防治保护对象腐败变质的一类制剂，国家标准规定在食品和药品中可以限量使用防腐剂。中药液体制剂如糖浆剂、合剂、煎膏剂、口服液等，由于制剂方面的诸多原因及患者开瓶服药可能造成的污染[1]，及其在平时贮存使用过程中，多次接触外界，特别容易发霉变质，添加防腐剂是常见的防腐措施[2]。中国药典2005年版对部分剂型中防腐剂的使用有部分规定，其中中药糖浆剂的防腐剂含量检测项目并没有规定，仅规定最高限量，苯甲酸和山梨酸为0.3%，对羟基苯甲酸脂类为0.05%[3]。本文主要采用气相色谱法（FID），建立了一种由样品经甲醇萃取溶解及超声提取，以盐酸调节适当pH值，加入定量内标物，采用大口径非极性毛细管色谱柱测定中药合剂及糖浆剂中的3中常见防腐剂的检测分析方法。

1 仪器与试药

美国安捷伦公司GC-6820型气相色谱仪、DB-1（30 m×0.25 mm×0.25 μm）大口径非极性毛细管色谱柱、氢火焰离子化检测器（FID）、GHL-500氢气发生器、WYK-2型空气压缩机、Agilent Cerity QA-QC NDS化学工作站、超声波清洗器、高速离心机等。

对苯二酚、山梨酸、苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯均为分析纯，甲醇为色谱纯，检测样品随机购买市售药品，见表1。

表1 实际样品品种及编号

2 方法与结果

2.1 色谱条件 采用美国Agilent公司的DB-1（30 m×0.25 mm×0.25 μm）大口径非极性毛细管色谱柱，氢火焰离子化检测器（FID），载气：氮气（纯度≥99.999%），流量为25 mL/min；燃烧气：氢气（纯度＞99.99%），流量为 30 mL/min，空气流量 360 mL/min。进样口温度250℃，初始柱温40℃，保持3 min后，以20℃/min升温至200℃，保持2 min，检测器温度300℃；不分流进样，进样体积1 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 标准溶液的配制 准确称取对苯二酚、山梨酸、苯甲酸各0.10g，对羟基苯甲酸乙酯0.05g。将山梨酸、苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯混合，用甲醇定容至50 mL容量瓶，作为标准溶液储备液，质量浓度为山梨酸、苯甲酸各物质2g/L，对羟基苯甲酸乙酯质量浓度为1g/L；将对苯二酚用甲醇定容至50 mL容量瓶，作为内标液储备液，质量浓度为2g/L。再用10 mL容量瓶定容稀释标准溶液储备液，同时每份加入对苯二酚内标液储备液0.10 mL配制成含山梨酸、苯甲酸各物质质量浓度分别为10、20、30、50、100 μg/mL，含对羟基苯甲酸乙酯质量浓度分别为5、10、15、25、50 μg/mL 的混合标准品系列溶液（其中内标物对苯二酚浓度均为20 μg/mL）。

2.2.2 样品溶液的前处理 称取待测糖浆样品1g左右置于10mL离心管中，加入5mL甲醇，用盐酸酸化至pH2.5，混匀，超声提取30min，然后以4 000r/min转速离心15 min，将上清液转置于25 mL容量瓶，加入对苯二酚内标储备液0.25 mL，定容至25 mL，配制成含内标物对苯二酚质量浓度均为20 μg/mL的样品待测溶液，备样直接分析。

2.3 标准曲线的绘制 准确移取上述标准系列混合溶液，进样1 μL，每一浓度重复测定3次，得到含3种防腐剂及内标物对苯二酚的气相谱图，利用内标物及各物质保留时间对各物质进行定性，以峰面积平均值为纵坐标，各物质浓度为横坐标作标准曲线。得到3种防腐剂的工作曲线回归方程、线性相关系数及线性范围，见表2。

表2 3种防腐剂的工作曲线回归方程和线性相关系数

2.4 精密度考察 取20和100 μg/mL的山梨酸、苯甲酸及10和50 μg/mL的对羟基苯甲酸乙酯的标准混合溶液1 μL样品用上述气相色谱条件进行分析，重复进样6次，根据每次测定色谱峰面积，计算出所测得各防腐剂含量，并计算出相对标准偏差（RSD）。3种防腐剂高低两种浓度其RSD为3.2%～3.9%，认为该方法有较好的精密度。结果见表3。

2.5 加样回收率实验 选取经过测定试样中含有对羟基苯甲酸乙酯，山梨酸和苯甲酸两种防腐剂低于检出限的中药糖浆剂样品1.0g，各添加山梨酸、苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯3种防腐剂标准品一定量，混匀，按照2.2.2节所述方法对样品进行前处理，然后按照2.1所述检测方法进行检测分析，重复进样3次，计算出回收率。测定结果表明，RSD分别为2.9%、3.0%、3.7%，回收率分别为95.4%、103.7%、97.8%，可以满足常规分析方法的要求。见表4。

表3 中药合剂及糖浆剂中3种防腐剂同时测定的气相色谱法精密度实验结果ng

表4 中药合剂及糖浆剂中3种防腐剂加标回收率计算结果（n=3）

2.6 最低检测限考察 对5个浓度的防腐剂标准品系列混合溶液进行分析，得到不同的色谱峰高和峰面积，以色谱峰高度是基线噪声高度的3倍作为标准计算检出限。山梨酸为1.2 μg/mL；苯甲酸为1.8 μg/mL；对羟基苯甲酸乙酯为 0.7 μg/mL。

2.7 样品中防腐剂的含量测定 用上述色谱条件及实验方法对以下6种中药合剂及糖浆剂样品（见表1）进行检测分析，获得结果，见表5。

表5 市售部分中药合剂及糖浆剂中防腐剂的检测结果

可见，样品中所含防腐剂检测出的种类和含量均符合现行国家药品标准允许量。

3 讨论

国内外有许多学者对食品中防腐剂山梨酸、苯甲酸、脱氢乙酸的检测进行了研究，他们大都采用气相色谱法和液相色谱法[4-9]。但这些方法操作复杂、时间长，不能适应食品药品行业发展的需要[9]。

本实验采用SE-54型高惰性交联弱极性色谱柱（30 m×0.25 mm×0.32 μm）对 3种防腐剂标准品及内标物进行测试，结果显示其能较好地分离各组分，但是拖尾比较严重。而采用DB-1型大口径非极性毛细管色谱柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）则较好地解决上述问题，同时还可以提高分析速度，减少固定相流失。气相色谱法分析中柱温的选择和升温程序设置是一个重要的因素。为缩短分析周期，并保证方法有较高的灵敏度和分离效果，对不同的初始柱温进行了实验，当初始柱温在40～70℃时，单位进样量峰高基本不变；当初始柱温大于70℃时，甲醇峰高明显降低。因此，选择初始柱温为40℃，保持3 min之后程序升温，使样品中山梨酸、苯甲酸色谱峰拖尾现象减少，并较好的分离了3种防腐剂。色谱峰通过对照保留时间、内标物的峰高及峰面积，并经过加标增加峰高的方法来定性，确保了该方法的准确性。

上述结果表明，该方法具有检测时间短、消耗试剂少、前处理简单、使用样品量少、方法准确度高、重复性好及精密度高等优点，并可应用于合剂及糖浆剂的监测工作。

[1]李会军，刘伟强.中药液体制剂中防腐剂的应用[J].中国野生植物资源，2009，17（4）：46－48.

[2]江敏利，王春华.浅谈防腐剂的功过是非[J].食品添加剂，2005，17（3）：12.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：化学工业出版社，2005：附录8.

[4]何凤云，顾卫东，朱子丰，等.毛细管气相色谱法测定食品中的防腐剂[J].现代仪器，2008，14（2）：68－70.

[5]殷德荣.毛细管气相色谱法同时测定食品中山梨酸、苯甲酸、脱氢乙酸、尼泊金丙酯[J].中国卫生检验杂志，2004，14（4）：469－470.

[6]王莉丽，宋 宇.HPLC法快速测定软饮料中苯甲酸、糖精钠、山梨酸的含量[J].渤海大学学报（自然科学版），2007，28（2）：129－131.

[7]康绍英，张继红.二极管阵列—高效液相色谱同时检测食品中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸[J].食品与机械，2007，23（5）：118－120.

[8]王咏梅，刘 恺，卢玉妹，等.毛细管区带电泳法测定食品中山梨酸、苯甲酸和糖精的含量[J].食品科技，2007，10（6）：227－229.

[9]李 林，汪书红.3种食品防腐剂的气相色谱法检测研究[J].现代预防医学，2009，36（17）：3343－3345.