苏 鹏，刘洪峰，石磊芝

(1辽阳市中心医院，辽宁辽阳111000;2辽宁医学院附属第一医院;3山东省临沂市人民医院)

食管癌的传统治疗手段较多，但患者的5年生存率并未明显提高，其主要原因是肿瘤的化疗耐药及侵袭转移。研究表明，肿瘤组织内有少数细胞具有干细胞特性，能促进肿瘤的生长、转移及诱导耐药性产生［1］。Nanog蛋白是多能干细胞的重要生物学标志物之一，其在肿瘤组织中的高表达与肿瘤转移、复发等生物学行为密切相关［2］。目前，关于Nanog蛋白在食管癌组织中的表达及临床意义的研究尚少，我们对此进行了研究。现报告如下。

1 资料与方法

1．1 临床资料 选择2008年1月～2011年12月在我们3家医院行手术切除的食管癌患者87例，男52例、女35例，年龄45～82(66±7．6)岁。按WHO组织学分型分级标准，高分化22例，中分化34例，低分化31例。无淋巴结转移37例，有淋巴结转移50例。TNM分期Ⅰ+Ⅱ期38例，Ⅲ期49例。患者均为初发，术前未行放、化疗。

1．2 方法

1．2．1 标本采集 取87例患者的食管癌组织(观察组)和距癌组织边缘＞5 cm的癌旁组织(对照组)标本，用4%多聚甲醛固定，常规石蜡包埋。食管癌细胞系TE-1、Eca-109购自上海中科院细胞库。

1．2．2 食管癌组织中的Nanog蛋白检测 应用免疫组化PV二步法，用PBS代替一抗作阴性对照，用已知的Nanog阳性蛋白染色精原细胞瘤作阳性对照。常规脱蜡至水，柠檬酸抗原微波修复后自然冷却;依次滴加一抗(1∶400稀释)和二抗(1∶100稀释)孵育。DAB显色，常规脱水、透明、封片。在高倍镜下取4个不同视野各计数200个癌细胞，按阳性细胞所占百分率分为:阴性:无阳性细胞;弱阳性:阳性细胞＜30%，呈浅黄色;中度阳性:阳性细胞30% ～50%，呈棕黄色;强阳性:阳性细胞＞50%，呈棕褐色。……