辛洪奎，张 超，王德利，吴剑宏，王超峰，何 勍，阮狄克

椎间盘退行性疾病是临床常见病、多发病，严重影响患者日常工作及生活。传统治疗手段存在一定不足，同种异体椎间盘移植是目前正在尝试的探索性治疗手段。但临床研究证实异体椎间盘移植后会出现不同程度的退行性改变，这将影响椎间盘移植的远期临床效果。如能通过合适的技术手段延缓移植椎间盘的退行性改变，将有可能使椎间盘退变性疾病的治疗达到更好的疗效。

本研究借鉴组织工程的理念来审视同种异体椎间盘移植，将同种异体椎间盘视作椎间盘组织工程的天然支架材料，并以组织工程的技术手段来优化同种异体椎间盘的生物活性，通过复合具有生物活性的种子细胞使之组织工程化。在体外成功构建组织工程化异体椎间盘的基础上，拟通过大动物实验研究细胞干预技术是否可有效延缓同种异体椎间盘移植后的退行性改变。

1 材料与方法

1.1 同种异体椎间盘的收集与冷冻保存

1 岁龄比格犬3 只，麻醉后处死，无菌切取胸段及腰段脊柱。自终板上下两侧锯断椎体，保留约3 mm终板下骨。标本取出后置于50 mL 离心管，加入含10%FBS 和DMSO 的DMEM/F12(1∶1)的培养基后逐级冷冻:4℃过夜，-20℃放置2 h，-40℃放置2 h，-80℃放置2 h，液氮保存。

1.2 犬髓核细胞的体外培养

8 周龄幼犬，麻醉处死后无菌切取脊柱，水平切开椎间盘，刮取胶冻状髓核置于15 mL 离心管中，2 g/L 胶原酶(Gibco，美国)消化2 h 后1 000 r/mim离心5 min，PBS 冲洗2 次，收集细胞接种于100 mL培养瓶，加入含10%胎牛血清(Gibco)F12 培养基(Gibco)，37℃，5% CO2，饱和湿度下培养。……