李 宾，宋振全，梁国标，赵 旭，毛振立，李晓明，吕 伟，雷 伟，蒋 为

我们前期的研究证实8-OH-DPAT在大鼠创伤性脑损伤(traumatic brain injury，TBI)后能够通过降低脑温抑制神经元的凋亡［1］。国外研究报告显示5-HT1A受体激动剂在多种脑损伤模型中具有神经保护作用，能够促进运动、认知功能的恢复及减轻脑组织病理学表现［2－4］。然而，8-OH-DPAT对TBI后神经元凋亡的影响研究还不充分［5－6］，并且8-OHDPAT对二次脑损伤的影响未知。我们制作二次脑损伤模型，研究8-OH-DPAT对大鼠弥漫性脑损伤及合并二次脑损伤后的神经元凋亡的影响。

材料与方法

1 实验分组

182只(330±25)g健康雄性Wister大鼠随机分为6组:空白对照组(A组，n=7)，假手术组(B组)，单纯DBI+NS对照组(C组)，单纯DBI+8-OH-DPAT治疗组(D组)，DBI合并SBI+NS对照组(E组)，DBI合并SBI+8-OH-DPAT治疗组(F组);B、C、D、E、F各组根据伤后取脑时间分为6、12、24、72、168h亚组，各亚组7只，n=35。A组不做任何损伤，B组除了不接受铁棒打击和双侧颈总动脉结扎其余手术操作同E组，DBI模型参照Marmarou方法制作，DBI后稳定15min，结扎大鼠双侧颈总动脉30min，做成缺血性二次脑损伤模型。

2 药物应用及取材

A、B组不使用任何药物;D、F组在DBI 15min后腹腔注射8-OH-DPAT(0.5mg/kg)［2－4］，8-OHDPAT(5mg/支)购自美国Sigma公司;C、E组在DBI 15min后腹腔注射等体积的NS;E、F组注射药物或NS后再施加二次损伤。到达时间点后，常规方法取脑、石蜡包埋，备做切片。

3 观察指标

将每只大鼠随机抽取5张切片分别观察以下指标，每张切片任取5个视野在400倍光镜下观察，取其平均值。

3.1 苏木精-伊红(HE)染色观察前额皮层病理表现。

3.2 TUNEL法检测前额皮层细胞凋亡:凋亡检测试剂盒购买自北京中衫金桥公司，求出每张切片各视野的凋亡指数(凋亡指数=凋亡细胞数/细胞总数×100%)。……