夏 武， 杨宇平， 陈永凤， 程 娜， 刘巨源△

(新乡医学院1药学院药理学教研室，2 第三附属医院呼吸内科，河南 新乡453003)

肺间质纤维化(pulmonary fibrosis，PF)是严重威 胁人类健康的疾病，迄今没有满意的治疗方法［1］。PF 过程中成纤维细胞(fibroblast，FB)大量增殖并转化为肌成纤维细胞(myofibroblast，MB)，MB 能分泌细胞外基质(extracellular matrix，ECM)，ECM 占据肺泡腔并导致肺结构不可逆重构，造成呼吸衰竭［2］。Ⅲ型胶原(collagen Ⅲ)是ECM 成分之一，在PF 时表达显著增高。信号转导子和转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3，STAT3)可被多种细胞因子和生长因子激活，活化的STAT3 进入核内调控基因转录，调节机体多种生理和病理过程。活化STAT 蛋白抑制剂(protein inhibitor of activated STAT3，PIAS3)能特异性抑制STAT3 蛋白活性，阻断STAT3 与靶基因结合。STAT3 在纤维化疾病中的作用还不清楚，有研究发现STAT3 对肝脏、皮肤和肾脏的纤维化形成有调节作用。全反式维甲酸(all－trans－retinoic acid，ATRA)作用广泛多样，已有研究证实ATRA 具有抗纤维化作用，ATRA 能否通过影响STAT3 和PIAS3 的表达来改善PF 未见报道。因此本研究采用转化生长因子β1(transforming growth factor beta 1，TGF－β1)诱导FB 向MB 转化制作肺纤维化体外细胞模型并给予ATRA 干预，应用RT－PCR 和Western blotting 方法观察ATRA 对TGF－β1诱导的HFL－I 细胞中collagen Ⅲ、STAT3和PIAS3 表达的影响，探讨ATRA 改善肺纤维化的机制。

材 料 和 方 法

1 试剂与仪器

人胚肺成纤维HFL－I 细胞购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心;ATRA 购于Sigma，DMSO 溶解，现配现用;TGF－β1购于Peprotech，10 mmol·L－1HCl 溶解，现配现用;RT－PCR试剂盒购于宝生物(大连)有限公司;单克隆小鼠抗β－actin、STAT3 抗体和多克隆兔抗p－STAT3 抗体购于Santa Cruz;羊抗小鼠、羊抗兔－HRP 购自武汉博士德公司;PCR 扩增仪为ABI 产品;电泳仪、转膜仪为北京六一仪器厂产品;凝胶成像系统为上海领成生物科技有限公司产品;酶标仪为Thermo 产品。……