黄海高， 李悦山

(广州医学院药理教研室，广东 广州510182)

硫氧还蛋白(thioredoxin，Trx)是广泛存在于生物体内的一种多功能小分子蛋白，因其具有重要的抗氧化和抗凋亡作用［1］而备受研究者重视。研究发现Trx 的抗凋亡作用主要通过抑制凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal－regulating kinase 1，ASK1)，进而抑制了ASK1 所介导的凋亡下游信号通路［2］。

多柔比星(doxorubicin，DOX)是一种蒽环类抗生素，临床上广泛应用于各种肿瘤的治疗［3］，但是其应用过程中会出现很强的心脏毒性［4］，进而导致各种心肌病与心力衰竭的发生［5－6］。研究表明DOX 的心脏毒性与心肌细胞的凋亡密切相关，但是目前有关凋亡的具体机制仍然不是十分明确。DOX 体外诱导心肌细胞凋亡过程中Trx－ASK1 是否会发生分离以及ASK1 是否会被活化进而启动凋亡下游信号通路，目前未见相关报道。

材 料 和 方 法

1 材料

1.1 主要试剂 DOX、ebselen 和细胞级二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)购于Sigma。高糖DMEM培养基、胎牛血清和胰蛋白酶购自Gibco。MTT、细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒、caspase－3 分光光度法检测试剂盒和细胞凋亡荧光Hoechst 33258 试剂盒购于南京凯基生物。荧光探针荧光素2'，7'－二氯二氢荧光素二乙酯(2'，7'－dichlorodihydrofluorescin diacetate，H2DCFDA)购于Molecular Probes。免疫沉淀试剂盒、BCA 蛋白测定试剂盒和发光液购自Pierce。兔Trx 多克隆抗体购于Millipore;山羊ASK1多克隆抗体购于Santa Cruz;聚ADP 核糖聚合酶1［poly(ADP－ribose)polymerase 1，PARP 1］、磷酸化ASK1(p－ASK1)、p38 有丝分裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen－activated protein kinase，p38)和磷酸化p38(p－p38)抗体购于Cell Signaling Technology。1.2 动物 SPF 级Sprague－Dawley 新生大鼠(1 ～3 d)，雌雄不限，由广州中医药大学动物中心提供。

2 方法

2.1 心肌细胞培养 乳鼠心肌细胞原代培养参照Simpson 等［7］的方法改进而得。取新生24 ～72 h 的SD 乳鼠消毒后，在超净台无菌操作下快……