史晓红 孙 亮 王 沥 金 锋 朱小泉 唐 雷 杨 泽

瘦素受体(leptin receptor，Lepr)属细胞因子受体超家族，人类Lepr基因定位于染色体1p31。Lepr基因是T2DM的一个重要候选易感基因，目前已经发现多种Lepr基因的多态性，Lepr基因的多态性对T2DM的影响日益受到关注。本文旨在研究Lepr基因第6外显子内的Gln223Arg多态性与中国北方人T2DM发生发展的关系。

材料与方法

1．实验材料:(1)对象:所有研究对象选自2004～2005年北京地区和哈尔滨地区T2DM流行病学调查资料，本研究中病例样本为:有糖尿病家族史，且相互间无亲缘关系的T2DM患者333例，其中男性120例，女性213例，年龄40～89岁，平均年龄60．61±11．05岁。对照样本为:无糖尿病家族史的糖耐量正常者，无急性心脑血管疾病、内分泌疾病，且相互间无亲缘关系，共395例。其中男性181例，女性214例;患者年龄40～80岁，平均年龄47．50±6．25岁。所有受试者均为汉族人，均签署了知情同意书。T2DM诊断依据1999年WHO诊断标准:①有明确糖尿病病史;②空腹血浆葡萄糖≥7.0mmol/L和(或)口服葡萄糖耐量实验2h血糖≥11．1mmol/L。根据病史和家族史排除1型糖尿病、年轻起病的成人型糖尿病及线粒体性糖尿病。(2)主要试剂:全血DNA提取试剂盒购自北京天为时代科技有限公司;DNA marker购自天根生化科技(北京)有限公司;引物由上海生工生物技术有限公司合成;限制性内切酶Msp I购自TaKaRa公司;dNTP，Taq酶购自北京鼎国昌盛生物技术有限公司。(3)主要仪器:PCR扩增仪为美国MJ公司的PTC－225型PCR仪;凝胶成像系统为美国Bio－Rad公司的Gel DOC－2000成像系统。

2．方法:(1)基因组DNA的提取:取EDTA Na2抗凝的外周血0．3ml，用全血DNA提取试剂盒抽提基因组DNA。(2)PCR－RFLP分析 上游引物:5'－ACCCTTTAAGCTGGGTGTCCCAAATAG－3'，下游引物:5'－ AGCTAGCAAATATTTTTGTAAGCAATT－3'。……