鄢海燕，邹纯才

(皖南医学院 1.药剂学与生药学教研室;2.药物分析与药物化学教研室，安徽 芜湖 241002)

熊胆为熊科动物黑熊Selenaretos thibetanus cuvie或棕熊Ursus arctos的干燥胆，为贵重中药。现代药理研究证实熊胆具有保肝利胆、镇静、抗惊厥、抑菌、解热作用，临床上广泛用于眼科、五官科、消化科、神经科［1～5］。20世纪80年代我国逐步进行开发研究，首先进行了化学成分、质量控制等项研究，其次进行了药理、药效及临床研究，并对熊胆粉制剂进行了开发研究。现广泛采用导管活体引流熊胆汁干燥而成，即引流熊胆。然而这种做法不利于熊的保护，因此寻找天然熊胆的替代品成为必然。此外市场上常以牛、猪、鸡胆汁干燥加工成粉或混合充当熊胆粉出售，因此有必要建立快速鉴别方法。本研究探讨了熊胆粉与牛、猪、鸡胆汁粉的傅立叶变换-红外吸收光谱(FT-IR)特征以利于它们的鉴别并对其药理作用进行比较，为寻找天然熊胆粉代用品提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料、仪器

1.1.1 材料 天然熊胆粉(四川省简阳市威杰养殖场;批号:20050216;批准文号:国药准字Z20000053);牛胆粉、猪胆粉、鸡胆粉为自制品，由新鲜牛胆、猪胆、鸡胆(购自芜湖市月河星城菜市场及氵鲁港菜市场)，分别剪开胆囊膜取出胆汁，经真空恒温箱干燥制得。昆明种小鼠，雌雄各半，19～22 g，由皖南医学院动物室提供。戊四氮(SIGMA公司，纯度≥99%，皖南医学院机能实验中心提供)，甘草片(批号:20101001，四川蜀中制药有限公司)，注射用苯巴比妥钠(批号:100907，福建省闽东力捷迅药业有限公司)。

1.1.2 仪器 Nicolet380型智能傅里叶红外光谱仪;YP-2压片机(上海齐益电子仪器有限公司);WS70-1型远红外快速干燥器(上海锦凯科学仪器有限公司);DZF-6030A型真空干燥箱(上海一恒科技有限公司)。

1.2 红外光谱测定方法

1.2.1 样品处理 分别将熊胆粉、猪胆粉、鸡胆粉、牛胆粉置玛瑙研钵中充分研细，置红外灯下烘干，分别取上述烘干粉末约1 mg，加溴化钾约100 mg，研磨混匀。

1.2.2 压片 将磨好的物料加入到压片模具中，铺匀，合上模具，将模具放入压片机上，压到压力表指针指向30 Mpa，稍停几分钟，使其压成片状。取出压成透明片状的物料，装入样品架待测。

1.2.3 红外光谱测定 先进行背景空白测定后，再把上述制备的样品片置于光路中，在4 000～400 cm-1间绘制各样品的红外光谱。

2 结果

2.1 IR分析

2.1.1 相关IR光谱图 不同动物胆粉样品及它们的混合品IR光谱，如图1(a～i)所示。

图1 各种胆粉的红外光谱图

2.1.2 各动物胆的图谱分析 熊胆粉主要成分为熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸与牛磺酸的结合体［6］。IR图谱显示与牛磺熊去氧胆酸对照品IR图谱［7］类似的特征:1 656 cm-1和1 557 cm-1双峰为酰胺基吸收峰，其中1 656 cm-1为酰胺基中C=O的伸缩振动峰，1 557 cm-1为酰胺基中NH弯曲振动及C-N伸缩振动峰的重峰;1 188 cm-1和1 051 cm-1为磺酸基(-SO3H)吸收峰。1 188 cm-1磺酸基吸收峰透光度与熊胆粉中熊去氧胆酸或鹅去氧胆酸与牛磺酸的结合比例有关，而它与2 954 cm-1的C-H伸缩振动透光度比值(T 1 188 cm-1/2 954 cm-1)接近1.0。744 cm-1为-(CH2)n(n≥4)链烷烃的CH面内摇摆振动产生。

牛胆粉主要成分为胆酸、去氧胆酸和鹅去氧胆酸及它们与牛磺酸和甘氨酸的结合体［8］。其IR图谱显示了与熊胆粉类似特征:1 640 cm-1和1 536 cm-1双峰为酰胺基吸收峰且两峰峰强相同，其中1 640 cm-1为酰胺基中C=O的伸缩振动峰，1 536 cm-1为酰胺基中NH弯曲振动及C-N伸缩振动峰的重峰;1 241 cm-1和1 076 cm-1为磺酸基(-SO3H)吸收峰;1 403 cm-1为氨基酸中COO-对称伸缩振动吸收峰。

猪胆粉主要化学成分为猪去氧胆酸与甘氨酸的结合体［9］，猪胆粉IR图谱没有熊胆粉上述3个主要IR特征。

鸡胆粉的主要化学成分为鹅去氧胆酸和胆酸与牛磺酸的结合体［10］。其IR图谱与熊胆粉的IR图谱基本一致，熊胆粉的3个主要IR特征鸡胆粉图谱中均有。

2.1.3 各胆粉混合样品IR图谱分析 熊胆粉与猪胆粉(1∶1)混合品的IR图谱如图。其图谱特征:1 656 cm-1和1 557 cm-1酰胺基吸收峰变为一个宽峰，T 1 188 cm-1/2 954 cm-1明显降低。

熊胆粉与牛胆粉(1∶1)混合品的IR图谱如图1a。其图谱特征:1 643 cm-1和1 548 cm-1酰胺基吸收峰峰强明显不同，744 cm-1的吸收峰被掩盖。

鸡胆粉与猪胆粉(1∶1)混合品的IR图谱如图1i。其图谱特征:1 656 cm-1和1 557 cm-1酰胺基吸收峰变为一个宽峰，T 1 188 cm-1/2 954 cm-1明显降低。

牛胆粉与猪胆粉(1∶1)混合品的IR图谱如图1h。其图谱特征:1 643 cm-1和1 589 cm-1酰胺基吸收峰变为一个宽峰，T 1 188 cm-1/2 954 cm-1明显降低。

2.2 药理作用

2.2.1 镇咳作用 取昆明种小白鼠60只，随机分为6组，每组10只，分别为对照组(生理盐水)、熊胆粉组(200 mg/kg)、猪胆粉组(200 mg/kg)、牛胆粉组(200 mg/kg)、鸡胆粉组(200 mg/kg)和阳性组(甘草片，200 mg/kg)，各组为灌胃给药，于给药后30 min，将小白鼠放入容器内用氨气熏1 min，立即取出小白鼠用烧杯扣住，记录取离氨气后3 min内的咳嗽次数，结果见表1。

2.2.2 抗惊厥作用 除阳性对照组为苯巴比妥钠(0.03 g/kg)外，小鼠的选择、分组及对照与样品组同“2.2.1”，各组为灌胃给药，给药后1 h，每组均皮下注射戊四氮65 mg/kg，记录20 min内小鼠惊厥的反应率。结果见表1。

2.2.3 解热作用 除阳性对照组为阿司匹林(200 mg/kg)外，小鼠的选择、分组及对照与样品组同“2.2.1”，于实验前置于实验室(环境温度28℃，相对湿度60%)适应环境，并测其肛温2次/d，以了解小鼠体温恒定与否，并使其适应测定肛温操作刺激。各组小鼠分别从背部皮下注射20%安琪高活性干酵母混悬液2.5 ml/kg，2 h后各组分别灌胃给药，空白对照组给予同体积蒸馏水，并于给药后1.5 h测量肛温。结果见表1。

表1 熊胆等四种胆镇咳、抗惊厥及解热作用结果

3 讨论

本研究采用了IR法可快速准确地定性鉴别出熊胆粉与牛胆粉、猪胆粉或四种胆粉的相互混合品。有文献报道采用TLC法［11］和HPLC法等鉴别熊胆粉与牛胆粉、猪胆粉和鸡胆粉等其他动物胆类药材，TLC法简单易行，但一是需要对照品且分析样品需前处理，二是展开剂往往具有一定的毒性。HPLC法虽也较常用，但一方面胆酸类成分仅有末端吸收，因此应用紫外检测器很易产生基线漂移，另一方面分析时间相对较长，往往需要对照品，分析成本相对较高。而采用IR法，一是样品不需前处理，可直接压片测定，分析时间较短，二是牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸等标准品的IR光谱可查阅有关文献进行比较，故不需要对照品，分析成本低。

红外吸收光谱一般要求样品的纯度大于98%，可用于分子结构的基础研究以及化学组分的分析。红外光谱特点决定它只能反映出样品中主要化学成分的红外光谱特征。熊胆粉主要含有熊去氧胆酸及鹅去氧胆酸等牛磺酸结合型去氧胆酸，而胆酸含量低，故其红外光谱图中没有明显的-C-O-H面外弯曲振动特征吸收峰。猪胆粉中的主要成分为猪去氧胆酸与甘氨酸的结合体，不含有牛磺酸结合体，因而不具有酰胺基吸收峰(1 656 cm-1和1 557 cm-1)，也不具有磺酸基吸收峰(1 188 cm-1和1 051 cm-1)。鸡胆粉中的主要成分鹅去氧胆酸与熊胆粉中的主要成分熊去氧胆酸的化学结构类似，只在-OH的空间构型上存在差别，即它们为差向异构体，因此IR法不能用于熊胆粉与鸡胆粉的鉴别。

四种胆粉均具有镇咳、抗惊厥和解热作用，其中牛胆粉和鸡胆粉镇咳作用较强，猪胆粉抗惊厥作用最强，而牛胆粉和猪胆粉的解热效果较好。

(致谢:皖南医学院药学系药剂学与生药学教研室包淑云博士对红外吸收光谱的录制给予了大力帮助，药学系2007级学生朱淑珍参与了实验数据的整理，在此表示感谢。)

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