周 兵，张根葆，，段 婷，周 珏，吴 娟

(皖南医学院 1.病理生理学教研室;2.病理学教研室;3.蛇毒研究所，安徽 芜湖 241002)

蛇毒作为目前研究较多的一类生物毒素，其体外抗肿瘤的效果已经得到了国内外学者充分的证实，被认为对多种肿瘤细胞有着特异性的杀伤作用［1，2］。但由于蛇毒成分复杂，且副作用大，给今后开发利用这一生物资源带来了不小的困难。因此分离纯化蛇毒中具有高效低毒的有效成分，被认为是蛇毒抗肿瘤工作者研究的方向。AAVC-Ⅰ为尖吻蝮蛇毒中提取的一种活性蛋白［3］。目前已经证明其具有广泛的抗凝血作用，但其抗肿瘤活性在国内外报道不多［4］。因此，基于实验室前期对蝮蛇毒组分抗肿瘤做过的研究工作为基础，进一步探讨尖吻蝮蛇毒组分在体外抗肿瘤作用［5，6］。分离出尖吻蝮蛇毒组分-Ⅰ，观察其对小鼠肺癌LLC细胞的增殖影响并初步探讨其机制，为寻求开发高效低毒高纯度的抗肿瘤新药提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 AAVC-Ⅰ是本院蛇毒研究所利用皖南尖吻蝮蛇毒粗毒经Cellulose DE-52离子交换和Sephadex G-75分子筛两步层析后获得的酸性蛋白质，其相对分子量约为23 ku。1640-RPMI为赛默飞世生物化学制品公司产品，胎牛血清(无支原体)为杭州四季青公司产品，四唑氮蓝(MTT)试剂盒、基因组DNA抽提试剂盒、DNA-Ladder、PBS胰酶、缓冲液、双抗(青霉素-链霉素)均为浙江碧云天公司产品。

1.2 细胞系及培养 小鼠肺癌LLC细胞，为本院药理实验室馈赠。LLC细胞为贴壁生长细胞。用含10%胎牛血清、1%的双抗的1640培养液置于生长环境为5%CO2、37℃的饱和湿度的培养箱常规培养。……