陈小梅，汪 泓，余彩铃，王 萍

(皖南医学院 1.医学一系;2.免疫学与微生物学教研室，安徽 芜湖 241002)

人类白细胞抗原-G(HLA-G)是一种具有独特分子结构的非经典的HLA-Ⅰ类分子，主要表达于绒毛外细胞滋养层上，具有较低的多态性，在诱导母胎免疫耐受中发挥重要作用，可抑制NK细胞及T细胞的杀伤作用，调节细胞因子的释放和诱导T细胞凋亡。近来研究均表明在不明原因的习惯性流产、妊娠高血压综合征等病理妊娠中HLA-G存在异常表达。本文采用实时荧光定量PCR检测自然流产与正常妊娠人工流产患者的绒毛组织中HLA-G mRNA表达水平，以探讨 HLA-G与自然流产的关系。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 研究对象 随机选取2010年5～8月在宣城地区医院及芜湖市第二人民医院妇产科进行自愿人工流产或自然流产的胚胎组织，其中人工流产的胚胎组织8例(对照组)，孕妇平均年龄(29.96±6.08)岁，平均孕周(7.54 ±0.76)周。自然流产患者的胚胎组织6例(实验组)，患者平均年龄(27.56±6.99)岁，平均孕周(8.11 ±1.10)周。经妇科超声检查、内分泌检查均无异常，排除感染、遗传、全身疾病，抗心磷脂抗体(ACA)、抗精子抗体、抗子宫内膜抗体均为阴性，夫妻双方染色体、免疫检查正常。

1.1.2 主要试剂 Simply P总RNA抽提试剂盒(BioFlux生物有限公司产品)，逆转录试剂盒(Fermentas公司产品)，SYBR® Green Realtime PCR Master Mix(购自上海东洋纺科技有限责任公司)，Bio S50(Bioflux公司产品)，6×Loading Dye solution(Fermentas公司产品)。

1.1.3 Real-time PCR 扩增引物 HLA-G(目的基因)引物、β-actin(β-肌动蛋白，内参照)引物(见表1)由上海生工合成。

表1 HLA-G、β-actin的引物Tab 1 Primers for HLA-G and β-actin amplification

1.2 方法

1.2.1 标本保存 取胚胎组织后，用无菌生理盐水清洗血污，置于密封无菌保鲜袋中，置－70℃低温冰箱保存。……