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结核抗体蛋白芯片法对泌尿系结核的诊断价值

2012-11-24陈宇东李苏利刘伟英高江平

中国实验诊断学 2012年6期
关键词:尿沉渣抗酸泌尿系

韩 刚,陈宇东,李苏利,刘伟英,张 倩,高江平

(1.解放军252医院泌尿外科,河北 保定071000;2.解放军总医院,北京100853)

近年来泌尿系结核发病率有所上升,但由于部分医生缺乏认识以及氟喹诺酮类抗菌药物的广泛使用,使得泌尿系结核症状多不典型,又缺乏快速特异性的检查措施,使不少患者延误诊治[1,2]。本研究中我们采用蛋白芯片法检测血清抗结核分枝杆菌脂阿拉伯甘露醇(LAM)、基因工程重组的16kD(结核分枝杆菌蛋白,分子量16kD)和38kD(结核分枝杆菌蛋白,分子量38kD)IgG抗体,并与尿沉渣找抗酸杆菌试验进行比较,探讨该方法对泌尿系结核的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料 泌尿系结核组:2009年3月-2011年3月我院泌尿外科收治的52例泌尿系结核患者,男性22例,女性30例;年龄中位数43(21-71)岁,其中单纯肾结核11例,肾输尿管结核25例,肾输尿管膀胱结核16例,均经组织病理检查或尿沉渣找抗酸杆菌试验并随访6个月以上确诊。对照组为同期收治的泌尿系非特异性感染患者89例,男性32例,女性57例,均经密切随访1年以上,其间均未出现结核相关症状,并多次尿沉渣找抗酸杆菌试验阴性。

1.2 检测方法 真空采集静脉血2ml分离血清(体积不少于150μl),新鲜血样在2-8℃环境下存放不超过48h。结核分枝杆菌IgG抗体检测试验盒(蛋白芯片)及生物芯片识别仪(PBT-X4)购自南京大渊生物技术工程有限公司,按说明书规定方法操作。

1.2 统计学处理 应用 Microsoft Office Excel 2003电子表格分别计算单独应用LAM/16kD/38 kD或联合应用2种/3种抗体诊断泌尿系结核的敏感性和特异性;并采用 MedCalc○RVersion9.6.4.0软件(Frank Schoonjans,Belgium)分别构建上述5项诊断试验的受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线,通过与尿沉渣找抗酸杆菌试验比较以及相互比较曲线下面积(area under the curve,AUC)、Z值及95%可信区间等指标评价其诊断效能。P<0.05作为差异显著性标准。

2 结果

如表1及图1所示,单独应用抗LAM、16kD和38kD抗体检测泌尿系结核的敏感性分别为67.31%、23.08%和61.54%,特异性分别为89.89%、96.63%和100.00%,相应的 AUC分别为0.786、0.599和0.808,其中38kD的AUC显著高于尿沉渣找抗酸杆菌试验(Z=2.042,P=0.041)。

表1 结核抗体蛋白芯片法与尿沉渣找抗酸杆菌试验对泌尿系结核的诊断效果评价

图1 结核抗体蛋白芯片法LAM/16kD/38kD和联合2种/3种抗体以及尿沉渣找抗酸杆菌试验的ROC曲线

联合2种或3种抗体检测泌尿系结核的敏感性分别为67.31%和11.54%,特异性分别为96.63%和100%,相应的AUC分别为0.820和0.558,其中联合2种抗体的AUC显著高于尿沉渣找抗酸杆菌试验(Z=2.042,P=0.041)。

3 讨论

泌尿系结核的诊断主要依靠病史分析、病原学检查和影像学检查[3,4]。其中以尿液病原学检查最为可靠。根据文献报道,连续3-5次尿沉渣找抗酸杆菌试验的阳性率为5.8%-42.7%[5,6],但患者会阴部、包皮、尿道口处可能存在的包皮垢分枝杆菌、枯草杆菌经抗酸染色亦为阳性结果,本研究中该试验的阳性率为46.15%,与文献报告基本一致,对照组中亦有9例结果为阳性,但经密切随访6个月以上未发生结核,考虑可能为收集尿液时受到其它分枝杆菌的污染,提示需严格控制标本采集条件;尿结核菌培养最具诊断价值[7],结果准确可靠,但阳性率低,操作复杂,培养时间长达4-8周,难以满足临床需要。

结核抗体蛋白芯片是基于生物芯片技术的一种新的检测方法,其基本原理是以微孔滤膜为载体,利用微阵列技术将的结核菌LAM、16kD和38kD等多种抗原固相于同一膜片上,使抗原抗体反应在固相膜上快速进行,再以免疫金作为标记物在膜上显色,然后通过加入芯片识别系统进行结果分析[8,9]。

LAM是分枝杆菌属细胞壁特有的一种多糖,具有较强的免疫原性,诊断结核病的敏感性较高[10,11],但除结核分枝杆菌外,如包皮垢杆菌、枯草杆菌等也含有LAM成分,因而其特异性较低[12]。本研究中,LAM阳性的诊断敏感性为67.31%,特异性为91.01%,对照组中有8例LAM阳性,经密切随访1年以上未发生结核病,考虑可能为其它分枝杆菌污染。38kD与16kD是结核分枝杆菌特有的抗原,与其它分枝杆菌不存在交叉反应,诊断特异性较高[13-14]。但其中16kD在人接种了卡介苗后也会产生相应的抗体。本研究中16kD阳性的敏感性为23.08%,特异性为96.63%,有3例对照组患者16 kD阳性,可能与上述情况有关。16kD的诊断价值较低,AUC仅为0.599,接近0.5,不但低于LAM(Z=3.253,P=0.001)和 38kD(Z=3.337,P=0.001),而且与尿沉渣找抗酸杆菌试验相比亦无显著性差异(Z=1.197,P=0.231)。接种卡介苗后人体同样会产生38kD抗体,但结核杆菌感染造成的38kD浓度明显高于接种卡介苗所产生的38kD浓度,所以38kD检测结果不受接种卡介苗影响。本研究中,38kD显示出与LAM相同的高敏感性,且特异性为100%,ROC曲线分析结果提示38kD抗体的诊断效能显著优于尿沉渣找抗酸杆菌试验(Z=2.042,P=0.041)。

联合检测2种/3种抗体检测泌尿系结核时,前者敏感性为67.31%,特异性为96.63%,ROC曲线分析结果提示该试验的诊断效能显著优于尿沉渣找抗酸杆菌试验(Z=2.328,P=0.020);后者特异性为100.00%,但敏感性仅为11.54%,AUC为0.558,可信区间跨越0.5(0.472-0.641),诊断价值较低,与尿沉渣找抗酸杆菌试验相比无显著性差异(Z=1.763,P=0.078)。

在显著优于尿沉渣找抗酸杆菌试验的2项试验中,联合检测2种抗体比单独应用38kD的诊断效能略优,但两者并无显著差异(Z=0.401,P=0.689)。对照组38kD阳性率为0%,提示38kD是诊断泌尿系结核的高特异性指标,对于否定病例患有泌尿系结核价值较高;而联合检测2种抗体的敏感性较好,可以作为确诊泌尿系结核的诊断试验。

综上所述,由于泌尿系结核表现不典型,尿沉渣找抗酸杆菌试验阳性率颇低,多次阴性仍不能排除结核诊断;同时蛋白芯片法血清结核抗体检查方便、快速、具有较高的敏感性和特异性,因此蛋白芯片法结核抗体(LAM、16kD和38kD)检测对泌尿系结核的诊断具有较高的临床应用价值。

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