罗伦才 季小平 张仲林 李列平 杨 彬 唐 玲 钟振东

（1 四川省凉山州第二人民医院，西昌615000； 2 成都医学院，成都610083；3 四川省人民医院实验动物研究所，成都610212）

水甲痔血胶囊系根据我院协定处方研制而成的院内制剂，由水指甲、栀子、黄连、夏枯草、僵蚕等药物组成，具有清热散结、凉血止血之功，用于痔疮肿痛、出血，对痔疮出血效果显著。为了给临床用药提供安全依据，根据国家新药相关法规和技术规范[1-5]，我们于2010年9月至2011年9月对水甲痔血胶囊进行了毒理作用研究，现将结果报告如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 动物 昆明种小鼠，56只，体重l8～22 g；SD大鼠，120只，体重110～140g。均雌雄各半，动物合格证号均为SYXK（川）2008-049号，由成都中医药大学实验动物中心提供。

1.1.2 药物 水甲痔血胶囊细粉，由凉山州第二人民医院制剂室提供，批号：20100813，每1g细粉含有0.3g生药。

1.1.3 试验仪器 KX-21N全自动血液分析仪，由日本东亚Sysmex公司生产；RT-1904C半自动生化仪，由美国Rayto公司生产；Leica-1015切片机，由德国徕卡仪器有限公司生产；TSJ-Q型全自动封闭式组织脱水机、BMJ-Ⅲ型包埋机及HY-Ⅲ型病理组织漂烘仪，均由江苏常州市中威医疗仪器有限公司生产；Motic BA400显微镜，由天津麦克奥迪实业集团有限公司生产。

1.2 方法

1.2.1 小鼠急性毒性试验 取合格昆明种小鼠20只，雌雄各半，用改良寇氏法计算LD 及95% 的可信区间，测定LD ；若无法测定LD 则测量最大耐受量，动物禁食不禁水12h后，用最高的药物浓度(能顺利通过灌胃针头)和动物的最大胃容纳量0.4 mL/10g，3次/d 给药，观察 14d[6]。

1.2.2 大鼠长期毒性试验 取110～140 g大鼠80只，雌雄各半，在动物房适应5d后，按体重和雌雄随机分为空白对照组(给生理盐水)和用药高、中、低剂量[分别为3.84、1.92、0.48 g (kg•d)]组，每组30只，雌雄各半，分笼饲养，每笼l0只。在实验室饲育1周，观察各组动物活动、进食、粪便等情况均无异常后，采用临床给药途径灌胃给药。各剂量组按等容积不同浓度，每l00g体重灌胃lmL药液，连续l3周。每周停药1d并称重，按体重增减情况调整用药剂量。实验期间观察动物的行为活动、外观体征、体重、毛发、进食及粪便等情况。末次给药后，每组取20只大鼠，雌雄各半，禁食不禁水12h，主动脉取血，分别进行红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血红蛋白(HGB)、LPR（淋巴细胞百分率）和凝血酶原时间(PT)等测定；血液离心后取血清进行尿素(UREA)、总胆红素(TBIL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)等测定；对脏器进行全面肉眼尸检，解剖取心、肝、脾、肺、肾、胸腺、子宫、肾上腺、胃、十二指肠，其中心、肝、脾、肺、肾、胸腺、子宫称取湿重，求出脏器系数，将上述器官用甲醛溶液固定，常规病理切片，进行组织学检查。余下的动物停药2周后，按上述方法进行检测，观察有无药物所致的延迟性变化。

1.3 统计学方法 用SPSS 13.0统计软件，组间比较用t检验。

2 结果

2.1 小鼠急性毒性试验 试验结果发现，水甲痔血胶囊的最大耐受量（MTD）为36g/kg，按60 kg人计算，相当于临床用量的1125倍，在观察期内，未发现动物有明显的中毒症状和死亡发生，14d后体重均有所增长。

2.2 大鼠长期毒性实验

2.2.1 一般情况 观察试验期间，动物活泼健康，皮毛光亮，行为活动、外观体征等未见异常，高剂量组大鼠在每次给药后出现粪便溏烂的现象，l～3 h后恢复，其余各组粪便性状未见异常。各组大鼠体重均呈增长趋势，给药4周及停药2周与空白对照组比较差异均无统计学意义，见表1。

表1 水甲痔血胶囊对大鼠体重的影响 (±s)

表1 水甲痔血胶囊对大鼠体重的影响 (±s)

注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

时间 n 空白组 高剂量组 中剂量组 低剂量组1周 20 147.77±5.58 147.53±8.67 145.93±8.11 145.10±9.73 2周 20 172.37±7.17169.97±12.00170.13±9.70 169.27±11.66 3周 20 195.67±6.74191.97±10.46192.33±9.05 189.10±13.01*4周 20228.17±10.10223.87±11.74223.13±12.11218.53±13.77**5周 20247.20±15.02245.10±11.83246.30±15.45 245.80±8.69 6 周 20270.10±12.31267.30±10.80271.70±16.06 268.70±9.46

2.2.2 脏器检查 尸检动物各脏器，肉眼观察未见病变，称取心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺，肾上腺等脏器湿重，计算出器官系数，并与空白对照组比较，给药4周后中低剂量组脑脏器系数降低，与空白组差异有显著性（P＜0.05），其余各组各脏器系数与空白组比较差异均无统计学意义。停药2周后，各组各脏器系数与空白组比较差异均无统计学意义。具体情况见表2。

表2 水甲痔血胶囊对大鼠器官系数的影响 (±s)

表2 水甲痔血胶囊对大鼠器官系数的影响 (±s)

注：与空白对照组比较，*P＜0.05

时间 n 组别 心 肝 脾 肺4周 20 空白组 0.36±0.033.12±0.40 0.57±0.14 0.70±0.10 20 高剂组 0.34±0.042.98±0.33 0.54±0.13 0.68±0.09 20 中剂组 0.35±0.033.10±0.44 0.59±0.16 0.68±0.10 20 低剂组 0.35±0.043.14±0.46 0.60±0.14 0.69±0.07 6周 10 空白组 0.31±0.032.52±0.30 0.40±0.04 0.58±0.04 10 高剂组 0.30±0.032.55±0.27 0.36±0.08 0.58±0.08 10 中剂组 0.30±0.032.58±0.39 0.40±0.07 0.55±0.05 10 低剂组 0.31±0.032.40±0.48 0.39±0.06 0.57±0.05时间 n 组别 肾 脑 胸腺 肾上腺4周 20 空白组 0.61±0.070.76±0.07 0.23±0.04 0.02±0.00 20 高剂组 0.59±0.060.72±0.070.20±0.02* 0.02±0.00 20 中剂组 0.63±0.100.72±0.05*0.22±0.04 0.02±0.01 20 低剂组 0.62±0.090.72±0.06*0.21±0.04 0.02±0.01 6周 10 空白组 0.49±0.070.56±0.04 0.16±0.02 0.02±0.00 10 高剂组 0.54±0.020.53±0.0290.14±0.02 0.02±0.00 10 中剂组 0.47±0.080.57±0.0370.16±0.04 0.02±0.00 10 低剂组 0.53±0.070.58±0.0250.16±0.03 0.02±0.00

2.2.3 病理组织学检查 病理切片观察给药4周和停药后2周(恢复期)各给药组的心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、肾上腺、睾丸、附睾、子宫及卵巢等均未见典型的炎症、增生或萎缩等病理学改变，与对照组比较均未见异常改变。

2.2.4 血常规检查 给药4周后，低剂量组RBC降低，高中低剂量组LPR均降低，与空白组差异有显著性（P＜0.05，P＜0.01），其余各组各指标均无统计学差异；停药2周，高剂量组HGB升高，低剂量组PLT降低，与空白组差异有显著性（P＜0.05），其余各组各指标均无统计学差异。血液生化学检查：给药4周后，高剂量组ALP、CREA及UREA均降低，中剂量组ALP、UREA及GLU均降低，低剂量组ALP、GGT、CREA及UREA均降低，与空白组差异有显著性（P＜0.05，P＜0.01），其余各组各指标均无统计学差异；停药2周，中剂量组TBIL降低，高剂量组CREA降低，与空白组差异有显著性（P＜0.05），其余各组各指标均无统计学差异。具体结果见表3～4。

表3 水甲痔血胶囊对大鼠血常规指标的影响 (±s)

表3 水甲痔血胶囊对大鼠血常规指标的影响 (±s)

注：与空白对照组比较，*P＜0.05,**P＜0.01

时间 n 组别 RBC（×1012/L）WBC（×1012/ L）HGB（g/l）4周 20 空白组 7.84±1.02 11.02±3.10 138.70±6.16 20 高剂组 7.33±0.97 10.78±3.45 138.65±6.28 20 中剂组 7.66±1.13 12.62±4.61 136.65±6.78 20 低剂组 7.09±0.59* 11.15±3.08 138.90±5.24 6周 10 空白组 7.09±0.91 9.16±2.07 137.00±6.90 10 高剂组 7.75±1.32 10.78±2.58 146.90±6.35*10 中剂组 7.44±1.38 11.21±4.80 142.50±11.88 10 低剂组 6.78±1.00 9.77±1.66 137.00±8.30时间 n 组别 LPR（%）PLT（×109/L）PT（s）4周 20 空白组 67.95±8.48 621.10±114.19 13.50±1.14 20 高剂组 75.10±6.51** 608.45±123.47 13.39±2.20 20 中剂组 72.75±7.48* 623.40±136.88 13.66±1.09 20 低剂组 74.35±7.22** 603.30±129.39 13.29±1.33 6周 10 空白组 73.20±5.39 672.40±115.48 13.38±1.49 10 高剂组 71.60±4.97 648.80±184.29 13.05±1.51 10 中剂组 68.10±6.87 600.30±153.55 13.17±1.15 10 低剂组 66.80±13.68 516.10±206.89* 14.02±1.05

表4 水甲痔血胶囊对大鼠血液生化学指标的影响 (±s)

表4 水甲痔血胶囊对大鼠血液生化学指标的影响 (±s)

注：与空白对照组比较，*P＜0.05,**P＜0.01

时间 n 组别 ALT（u/L）AST（u/L）TBIL（μm/L）ALP（u/L）4周 20空白组 48.45±9.06 161.17±29.68 4.22±1.26 225.90±79.00 20高剂组 51.87±11.57154.48±20.27 3.87±1.09 177.95±45.41*20中剂组 50.98±6.88 153.08±24.58 4.52±1.37 180.30±47.44*20低剂组 48.02±11.74150.78±21.52 4.42±1.65 181.70±86.10*6周 10空白组 48.92±6.09 144.44±26.61 3.07±0.79 96.60±37.68 10高剂组 54.17±8.55 152.56±31.34 2.45±0.58 123.80±30.76 10中剂组 76.62±81.78174.91±119.85 2.15±0.54** 123.30±72.31 10低剂组 98.02±74.43221.38±116.35 2.94±0.45 104.50±47.61时间 n 组别 GGT(IU/L)CREA(μm/L)UREA(mmol/L)GLU(mmol/L)4周 20空白组 1.70±0.66 65.31±23.39 7.71±2.81 5.86±0.69 20高剂组 1.60±0.60 56.44±5.68* 6.09±1.428** 5.27±0.44**20中剂组 2.05±0.69 61.94±6.53 6.21±1.20** 5.73±0.86 20低剂组 1.22±0.787* 56.41±8.49* 6.12±0.86** 5.52±0.64 6周 10空白组 2.30±0.82 61.93±9.04 7.17±1.72 4.88±0.41 10高剂组 2.00±0.67 54.80±4.84* 6.40±0.77 5.01±0.71 10中剂组 2.10±1.10 57.89±6.83 6.24±0.76 4.84±0.48 10低剂组 1.70±0.68 63.03±4.48 7.05±1.01 5.31±1.29

3 讨论

水甲痔血胶囊临床采用口服给药途径，以最高药物浓度(能顺利通过灌胃针头)和动物的最大胃容纳量0.4mL／10 g，3次／d给药，连续观察14 d，未见死亡。急性毒性试验表明，水甲痔血胶囊的最大耐受量为36g／kg，相当于成人临床用量的1125倍。

本试验以高、中、低3个剂量连续给大鼠灌胃90d，进行长期毒性实验。通过观察其进食、体重、外观体征和行为活动、粪便性状等一般状况，血常规、肝、肾功能和心、肝、脾、肺、肾、脑、肾上腺、胸腺等脏器系数及病理学组织检查，与对照组比较均未见异常，提示水甲痔血胶囊对上述器官无病理性损害。就体重而言，给药4周及停药2周后与空白组比较，各剂量组动物的体重有所下降，但均无统计学意义（P＞0.05）。就脏器系数与空白组比较而言，除中低高剂量组脑在给药4周后降低且有显著性差异（P＜0.05），其余脏器无差异。就血常规指标而言，与空白组比较各组在给药4周，低剂量组红细胞降低，高中低剂量组淋巴细胞百分率均降低，且有显著性差异（P＜0.05，P＜0.01）；停药2周，高剂量组血红蛋白含量升高，低剂量组血小板降低，且有显著性差异（P＜0.05），其余各组各指标变化均无差异。就血生化指标而言，给药4周高中低剂量组碱性磷酸酶及尿素降低，高低剂量组血肌酐降低，中剂量组血糖降低，低剂量组γ谷氨酰转肽酶降低，与空白组差异有显著性（P＜0.05，P＜0.01）；停药2周，中剂量组TBIL降低，高剂量组血肌酐降低，与空白组差异有显著性（P＜0.05），其余各组各指标均无统计学差异。组织病理检测结果显示，各组各脏器均无异常病理变化。综上所述，在13周给药期间未见明显毒性反应，亦未见延迟毒性反应。

本实验对水甲痔血胶囊进行了毒理作用研究，通过对上述实验结果分析认为，水甲痔血胶囊在规定剂量下服用是安全可靠的，为其临床安全性用药提供了可靠实验依据。

[1]国家食品药品监督管理局.药品注册管理办法[S].2007.

[2]国家食品药品监督管理局.中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则[S].2005.

[3]国家食品药品监督管理局.中药、天然药物长期毒性试验技术指导原则[S].2005.

[4]国家食品药品监督管理局.药物非临床研究质量管理规范[S].2003.

[5]卫生部药政局.中药新药研究指南（药学、药理学、毒理学）[S].1994.

[6]陈奇.中药药理研究方法学[M].2版,北京:人民卫生出版社,2006:107-113.