袁丹妮 李洪秀 王鹏

BMSCs在体外环境下可以分化为肝细胞系。此外，MSCs存在于骨髓，具有供源丰富、易于获得、有自体供源、避免免疫排斥等优点。骨髓源的MSCs是较为理想的肝干细胞来源。本实验以HGF和EGF作为诱导分化剂，在体外诱导大鼠源性骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化，并检测其分化率。试图为肝细胞移植找到新的种子细胞来源。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SD大鼠8只，(辽宁医学院动物实验中心提供)。

1.2 方法

1.2.1 BMSCs的取材、分离及培养 ①10%水合氯醛腹腔注射麻醉致死大鼠，无菌条件下取出双侧股骨，剔除骨表面肌肉和骨膜，剪去两骺端暴露髓腔。②用D-HANK'S液冲洗髓腔至冲洗液澄清，轻轻吹打冲洗液，用200目钢网过滤掉大的团块后收集，1000rpm离心8 min;弃上清，用DMEM培养基(含15%FBS、青霉素100 U/ml、链霉素100 U/ml)重悬细胞。③显微镜下计数后，以1×105/ml密度接种于50 ml培养瓶中，置恒温孵箱(37℃，5%CO2饱和湿度)培养;48 h后全量换液。以后每周换液两次。等细胞长满瓶底的80%～90%时，传代培养。

1.2.2 诱导实验

1.2.2.1 实验分组 见表1。

表1 实验分组

1.2.2.2 诱导方法 取传至2代的大鼠BMSCs，常规消化后，取1 ml 1×104/ml细胞悬液接种于24孔培养板中(孔中预先放置无菌盖玻片)，待细胞生长近汇合状态(约占瓶底80%)时，弃除培养基，加入诱导培养液 1 ml，置于恒温孵箱(37℃、5%CO2)内进行诱导。在此过程中，用倒置显微镜连续观察细胞形态学变化。各组在诱导第7、Zdl行免疫细胞化学染色。拟行诱导分化的BMSCs，培养基中均不加防止细胞分化的LIF。

1.2.2.3 免疫细胞化学染色 接种于6孔板内细胞达到诱导时间后，行ABC法免疫细胞化学染色。……