韩俊萍，李彩霞，严 红，朱 典，李艮平，胡 兰

（1.中国人民公安大学，北京 100038；2.公安部物证鉴定中心，北京 100038；3.法医遗传学公安部重点实验室，北京 100038；4.重庆医科大学，重庆 400016）

低体积PCR扩增用于单细胞分离和检验

韩俊萍1，李彩霞2，3，严 红2，朱 典4，李艮平4，胡 兰2，3

（1.中国人民公安大学，北京 100038；2.公安部物证鉴定中心，北京 100038；3.法医遗传学公安部重点实验室，北京 100038；4.重庆医科大学，重庆 400016）

目的 优化在单细胞分离检验中应用0.2mL试管做低体积扩增载体的最佳反应条件。 方法 制备理想口腔上皮细胞悬液，用0.2mL试管分别收集捕获到的5、10个细胞，设置蛋白酶K添加、PCR反应金牌酶用量、循环次数3组条件，用Identifiler®Plus试剂盒进行复合扩增，比较各组的检出率、等位基因丢失率和非特异性扩增情况。 结果 用0.2mL试管做低体积扩增中，加蛋白酶K裂解、PCR反应金牌酶0.4μL、PCR反应32个循环，这3个条件的检出率较高，等位基因丢失率较低。 结论 在单细胞分离检验中采用0.2mL试管进行低体积扩增，可以作为芯片-低体积扩增的有效补充手段。

法医遗传学；核酸扩增技术；单细胞

混合生物检材的DNA分型问题是法医实际检案的难题之一，而近些年来发展起来的单细胞分离检验技术[1]是实现混合样品分离检验的有效方法之一。有研究建立了单细胞分离检验技术，其中的芯片-低体积扩增技术使整个平台的灵敏度显著提高[2-6]。但在实际应用中发现，低体积扩增技术使用的扩增玻片采用开放设计的模式，对实验环境和操作的要求较高，并且需要单独购置扩增仪器，增加了成本，不利于该技术的推广和应用。……