杨海涛

Chelex－100法提取真核表达质粒pcDNA3－HERG的应用体会

杨海涛

目的 探讨Chelex－100法提取先天性长QT综合征相关人类真核表达质粒pcDNA3－HERG的可行性。方法 分别用Chelex－100法和碱裂解法提取pcDNA3－HERG质粒，将环状质性DNA酶切为线性，0.8%琼脂糖凝胶电泳后紫外灯下检测质粒提取的有效性。结果 用Chelex－100法和碱裂解法提取的pcDNA3－HERG质粒的OD(A260/A280)比较差异无统计学意义［分别为(1.8±0.6)，(1.9±0.4)，P＞0.05］，经0.8%琼脂糖凝胶电泳后紫外灯下检测均有特定的清晰条带。结论 两种方法均能提取纯度较高的大肠杆菌质粒DNA，Chelex－100法简便、省时，值得推广。

pcDNA3－HERG; 真核表达质粒质粒;Chelex－100法;SDS－碱裂解法

先天性长QT综合征(long QT syndrome，LQTS)是由于编码心肌离子通道蛋白的基因突变导致心肌细胞膜离子通道功能障碍而引起的一组临床综合征。目前已发现了10个LQTS的相关基因，其中HERG基因突变引起编码心脏延迟整流钾电流功能障碍的长QT综合征在中国较为常见。人类真核表达质粒pcDNA3－HERG是研究该蛋白功能的有效工具。经典的碱裂解法是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法，适合于所有生物检材，且提取的质粒纯度高，但操作繁琐、复杂、费时，本文旨在探讨一种新的操作步骤简单、省时提取质粒的方法，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 大肠杆菌质粒来源 大肠杆菌感受态细胞DH5a:北京天为时代生物公司。

1.2 主要试剂 质粒pcDNA3－HERG:美国Wisconsin大学Anson BD博士惠赠，Chelex－100(Bio－Rad)，DL2000marker (北京天为时代生物公司)，碱裂解法质粒小量制备试剂盒DP2602(北京百泰克)，固体培养基，限制性内切酶 BamHI (购自Promega公司)，50×TAE，溴化乙锭(EB)，0.8%琼脂糖凝胶，其余试剂均为进口及国产。

1.3 主……