许 菲

（蚌埠市第三人民医院，安徽 蚌埠 233000）

心律失常为心血管病中的常见疾病，包括慢性心律失常和快速性心律失常。目前，很多治疗心律失常药物的作用机制是通过影响心肌细胞膜上各种离子通道的活性状态而实现的［1，2］。有文献报道［3，4］，α肾上腺素受体激动剂有可能导致心律失常，而作为α肾上腺素受体阻断剂的甲磺酸酚妥拉明（Phentolamine Mesylate，PM）或许会抑制此作用，故本实验采用膜片钳全细胞记录技术研究PM对正常大鼠心室肌细胞膜钠离子通道电流的影响［5，6］，进而了解PM是否有抗心律失常作用。

1 材料

1.1 动物

选取体质量为200～250g的9～10周龄的SD大鼠（雌雄不限），由蚌埠医学院实验动物中心提供。

1.2 试药和仪器

实验药物：PM购自上海旭东海普药业有限公司。试剂：胶原酶Ⅰ型，购自Sigma公司，批号：No232－582－9。仪器：倒置显微镜（日本OLYMPUS公司）；膜片钳放大器（EPC－9，德国）；微电极拉制器（NARISHIGE，日本）；液压微电极推进器（NARISHIGE，日本）；显微镜摄像机（日本JVC公司）；模数／数模转化器（Digitata1200A／B，美国AXON公司）；恒温水浴箱（DR－HW－1型，北京）；心肌细胞封接监视器（SONY SSN，日本）；记录分析软件（Patch Clamp 6.01，美国AXON公司）。

2 方法与结果

2.1 细胞分离

单个心室肌细胞是采用酶解的方法进行分离。用苯巴比妥钠（30mg／kg i.p）麻醉后，立即开胸取出心脏，置于2℃的无Ca2＋台氏液中，心脏经修饰后固定在Langendorff灌流架上，用无Ca2＋台式液经主动脉根部逆灌流5min，用含胶原酶I及0.2%牛血清蛋白的无Ca2＋台氏液反复灌流12 min，至心脏膨大出现拉丝后从灌流装置上取下，剪成小块，吸管反复吹打，最后吸取上清液保存在KB液中备用。

2.2 细胞封接与全细胞记录模式的形成

取上述保存的心室肌细胞上层悬液数滴，滴于细胞池中，选取表面光洁、横纹清晰的心肌细胞为研究对象。……