血管紧张素Ⅱ1型受体抑制剂对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤的实验研究
2012-11-05石海燕胡维维杨秀媚赖均鹏徐园园陶金华
石海燕,胡维维,许 欣,杨秀媚,赖均鹏,徐园园,陶金华
(佛山市第一人民医院 病理科,广东 佛山528000)
子宫内膜癌是妇科常见恶性肿瘤之一。因此,体外建立子宫内膜癌模型对研究其发病机制与治疗具有极为重要的意义。本研究应用血管生成因子(VEGF)和肿瘤血管密度(MVD)两个指标评估人子宫内膜癌祼鼠皮下移植瘤内血管形成程度,现报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料
细胞株:人子宫内膜癌HEC-1B细胞株选自上海生命科学研究所,HEC-1B细胞以常规方法复苏、培养。取部分细胞进行种植,其余冻存于液氮罐中。实验动物:4-6周龄BALB/C雌性裸鼠12只,体重15-16g左右,购自广东省中山医科大学动物中心,均置于SPF环境下饲养。将裸鼠随机分为肿瘤组和血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)肿瘤抑制组,每组6只。免疫组化试剂:CD34和VEGF均购自DAKO公司;厄贝沙坦购自Sanofi Winthrop Industrie公司。
1.2 方法
1.2.1 HEC-1B细胞的培养和细胞悬液的制备及裸鼠接种 复苏后的细胞株置于含10%胎牛血清的MEM培养液中,于37℃、5%CO2培养基中培养。选择处于对数生长期的细胞,用0.25%浓度的胰酶对其进行消化,然后PBS洗涤细胞2次;以1 000转/min的转速对细胞悬液离心5min,收集细胞,用0.9%浓度的生理盐水悬浮细胞,将细胞浓度调整至1×106/ml,接种至裸鼠右上肢背部皮下组织。
1.2.2 分组及给药 接种当天把裸鼠随机分为2组,除正常饮食外,肿瘤组每天胃饲生理盐水1次0.5ml,肿瘤抑制组每天胃饲10mg/kg的 AT1R抑制剂0.5ml,观察裸鼠的成瘤情况,约10天左右成瘤。成瘤后4周后,处死模型鼠,取下肿瘤,部分组织存储于液氮中备用,部分用10%甲醛固定。……
