孙庆国，赵文静，王日中，陈 锋

（吉林省肝胆病医院 检验科，吉林 长春130062）

骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSCs）是骨髓中一类具有多分化潜能的干细胞，在一定诱导条件下不仅可分化为中胚层的骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞，而且能分化成外胚层的神经元、神经胶质细胞及内胚层的肝细胞［1－4］。MSCs向心肌细胞的分化为扩张性心肌病、心肌梗死等的治疗带来了新的希望［5］。研究证明，5－氮胞苷（5－aza）可诱导MSCs向心肌样细胞分化，但如何促进MSCs向心肌细胞分化仍是需要重点研究的问题，为此本研究分离培养大鼠骨髓MSCs，并采用扩张性心肌病大鼠血清和5－氮胞苷诱导培养骨髓MSCs，为MSCs向心肌细胞分化选择最适微环境提供实验基础和理论依据。

1 材料和方法

1.1 实验材料

DMEM培养基（Gibaco），胎牛血清（杭州四季青生物技术公司）；胰蛋白酶（Introvigen）、5－氮胞苷（Sigma）；淋巴细胞分离液（密度：1.077，上海试剂二厂，中国），SD大鼠（吉林大学基础医学院医学动物实验中心），兔抗大鼠肌钙蛋白（cTnT）单抗（丹麦DAKO公司），SP免疫组化染色试剂盒（福州迈新生物技术公司）。

1.2 大鼠骨髓MSCs的分离培养

选用8天SDE大乳鼠4只，断头处死，无菌分离股骨和胫骨，冲洗骨髓腔制成细胞悬液，淋巴细胞分离液密度梯度离心分离单个核细胞，接种2×106个单个核细胞于10cm培养皿中，37℃、5%CO2培养48h后换液，培养约10～14天细胞接近融合时按1∶4传代，并标记为Passage1（P1）；重复以上操作，传代培养。

1.3 大鼠骨髓MSCs的表型鉴定

取3代MSCs细胞1×104个／孔接种于24孔培养板中（孔中预先放置无菌盖玻片），37℃、5%CO2培养，待MSCs生长接近80%融合时，取出盖玻片，PBS冲洗，4%多聚甲醛固定15min，蒸馏水冲洗，免疫细胞化学染色检测MSCs细胞表面标志CD44、CD29的表达，严格按照说明书进行操作。……