杨永净，刘士新，刁建东，曹 玲，柳群丽

（1.吉林省肿瘤医院 放疗一科，吉林 长春130012；2.吉林大学中日联谊医院 肿瘤血液科）

鼻咽癌是我国常见的恶性肿瘤之一，在头颈部恶性肿瘤中占首位。放射治疗是鼻咽癌的主要治疗手段，早期病人单纯放疗效果较好，但因其发生部位隐蔽，症状多样性，就诊病人70%为局部晚期病人，单纯放疗疗效较差，局部复发和远处转移为常见的失败原因。为提高局部晚期鼻咽癌的治疗效果，局部放疗和全身化疗相结合成为国内外研究的热点。我们的前期研究发现紫杉醇可使细胞周期阻滞于G2／M 期，并诱导细胞凋亡和促进肿瘤细胞再氧合，而处于G2／M期的肿瘤细胞对放疗敏感。本研究应用紫杉醇联合放疗对鼻咽癌CNE细胞株凋亡蛋白表达的影响，进一步探讨紫杉醇对鼻咽癌细胞放疗增敏作用的机制。

1 材料与方法

1.1 细胞株、药物和试剂

人鼻咽癌CNE细胞株购自中国科学院上海细胞库，紫杉醇为山西普德公司产品。噻唑蓝（MTT）、二甲基亚砜（DMSO）购自Sigma公司，RPMI－1640、胰蛋白酶购自GIBCO公司，胎牛血清购自天津TBD公司。

1.2 细胞及培养条件

人鼻咽癌细胞培养于含有10%胎牛血清的PRMI－640培养基中，37℃，5%CO2条件下常规培养。

1.3 细胞总蛋白的提取

将对数生长期的鼻咽癌CNE细胞随机分为四组：空白对照组（不进行任何处理，给予等体积PBS）；放疗组（细胞以6Gy剂量进行照射）；紫杉醇组（细胞加入亚细胞毒剂量紫杉醇）；放疗联合紫杉醇组（细胞加入亚细胞毒剂量紫杉醇后，以6Gy剂量进行照射），将分组后的细胞株培养24h后，冷PBS洗涤2次，加入预冷的蛋白裂解液100μl，置于4℃摇床，温和振荡15min，14 000rpm，4℃离心15 min，取上清为全蛋白提取物。……