蒿姗姗，李 薇，王 畅，崔久嵬

（吉林大学第一医院 肿瘤中心，吉林 长春130021）

胃癌（GC）是世界第二大致癌症相关死亡的最常见的原因之一，也是我国最常见的恶行肿瘤之一。近年来，胃癌的发病呈上升趋势，探讨其发病机制对其诊治具有重要意义。

增 殖 诱 导 配 体 （APRIL）（又 称 TALL－2，TRDL1，或TNFSF13）是肿瘤坏死因子（TNF）家族的一个成员。它最初确定是1998年由Hahne等［1］首先发现，因刺激肿瘤细胞的增殖而得名。APRIL在正常组织的表达很弱，但在多种肿瘤细胞和组织，如肺癌、黑色素瘤［2］，特别是胃肠道肿瘤有高水平表达［1，3］。在本项研究中，我们通过构建 APRIL siRNA慢病毒载体并转染人胃癌MGC803细胞，观察其对MGC803细胞增殖及细胞周期的影响，以探讨其在胃癌发病中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

人胃癌细胞系 MGC803（购自ATCC）；大肠杆菌菌株DH5α、293T细胞（本实验室保存）；RPMI 1640培养液、胎牛血清（Gibco公司）；M－MLV逆转录酶（Promega公司）；Lipofectamine 2000、Trizol试剂盒（Invitrogen公司）；限制性内切酶、PCR试剂盒 （TaKaRa公 司）；MTT、核 糖 核 酸 酶 （Sigma－Aldrich公司）；慢病毒载体pLVTHM、psPAX2、pMD2.G（均购自Biovector Science Lab）。

1.2 方法

1.2.1 APRIL siRNA慢病毒载体质粒的设计与构建 根据人APRIL基因mRNA序列（NCBI Reference Sequence：NM＿172088.1），通过siRNA“Target Finder Tool”设计软件（GenScrip公司网站提供）设计针对目的基因ARPIL的干扰序列：5’－aaTCCAGGATGCTGGAGTTTA－3’，同时设计阴性 对 照 序 列 （nonsilencing，NS）：5’－TTCTCCGAACGTGTCACGT－3’。通 过 BLAST 同 源 性分析，排除了干扰序列非特异性抑制其他基因序列的可能。用化学合成法合成DNA寡核苷酸，退火，并插入到包含绿色荧光蛋白（GFP）的慢病毒载体pLVTHM中，最后将连接产物转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞，涂布平板，37℃过夜培养。对长出的单克隆菌落进行PCR鉴定，并通过限制性内切酶分析及DNA测序鉴定。

1.2.2 细胞培养与慢病毒的制备与转染 人胃癌细胞MGC803和293T细胞，于含有10%胎牛血清、100U／ml青霉素和100mg／ml链霉素的RPMI 1640培养基，37℃，5%CO2饱和湿度培养箱内孵育。……