黄柳桓，张亚南，康熙雄

（1.首都医科大学石景山教学医院·北京市石景山医院 胸外科，北京100043；2.首都医科大学附属北京天坛医院 检验科，北京100050）

心脏疾病诸如心肌梗死、慢性心衰和心肌肥大与心肌细胞的细胞偶联改变相关。缝隙连接蛋白43（Connexin 43，Cx43）是心室电偶联的主要蛋白，动物试验证明Cx43基因突变小鼠虽然有正常心脏结构和收缩功能，但2个月内容易因自发性室性心律失常而死于心源性猝死［1］。缺血／再灌注损伤机制的研究发现因缺血诱导的细胞脱偶联和Cx43去磷酸化，使Cx43从缝隙连接转移进入细胞池而改变细胞间通讯信号［2，3］。Cx43含量、分布及其磷酸化的改变和异常表达导致心肌细胞功能阻滞，形成阵发性室性心动过速［4］。

乙酰胆碱（ACh）是内皮依赖性血管扩张剂，药理作用是模拟缺血预处理，使心脏在随后出现的缺血环境下抵御梗死、预防梗死、防止冠状动脉阻塞或心脏病发作［5］。ACh通过上调 TNF receptor－2和下调 TNF receptor－1［6］、抑制缺氧诱发细胞凋亡［7］抵御缺血等多种途径保护心脏，然而在缺氧条件下ACh增加Cx43磷酸化保护心脏的作用机制仍不清。我们曾报导ACh可抑制缺氧引起Cx43表达降低并恢复Cx43功能［8］，本文继续讨论在缺氧条件下H9c2细胞Cx43磷酸化动态变化及ACh诱导Cx43分布改变。

1 材料与方法

1.1 细胞培养和药物制剂

用含有10%胎牛血清（Sigma）、青霉素（100IU）、链霉素（100μg／ml）的 DMEM（Dulbecco’s modified Eagle’s medium）（Sigma）培养液培养H9c2细胞，置于5%CO2、37℃培养箱。ACh（Sigma，1mM）预处理 H9c2细胞1小时，随后置于37℃、5%CO2，10%H2和85%N2的缺氧环境1小时。一氧化氮合成酶抑制剂N－硝基－L－精氨酸甲酯（N－nitro－L－arginine methyl ester，L－NAME）（Sigma，1mM）与ACh共同处理细胞1小时，随后缺氧1小时。……