糖基化终产物对人牙周膜细胞增殖和NF-κB mRNA表达的影响
2012-11-05王新文王勤涛
房 明,汪 涛,王 欣,王新文,王勤涛
(第四军医大学口腔医学院,陕西西安 710032)
牙周炎和糖尿病(Diabetes mellitus,DM)都是人类最常见的慢性疾病。许多研究证明牙周病与糖尿病之间有相互联系,并且已经将牙周病列为糖尿病的第六大并发症[1-2]。糖基化终产物(Advanced glycation end products,AGEs)是体内持续高血糖刺激下形成的非酶氧化的不可逆蛋白之一,与糖尿病的多种并发症均有密切关系[3],当AGEs与人牙周膜成纤维细胞表面的特异性受体(Receptor of advanced glyation end products,RAGE)结合后可刺激细胞分泌炎症因子,加速细胞的凋亡过程等,继而对牙周组织的损伤和修复造成影响。NF-κB是一种重要的转录因子,参与诸多免疫调节作用,例如细胞凋亡、肿瘤坏死等[4]。有研究指出[5],AGEs能抑制人牙龈成纤维细胞的增殖,并可促进基质金属蛋白酶-1的合成,导致胶原降解,加剧糖尿病病人牙周炎的进程。
本研究通过观察糖基化终产物对人牙周膜细胞增殖及NF-κB表达的影响,以期进一步探讨糖尿病伴慢性牙周炎的发病机制,并为临床治疗提供一定的理论依据。
1 材料和方法
1.1 主要试剂和仪器
DMEM培养基(HyClone,美国);胰蛋白酶、胎牛血清(杭州四季青生物工程有限公司);I型胶原酶(Gibco,美国);人血清白蛋白(Sigma,美国);流式细胞分析仪(Beckman Coulter,美国);Power/PAC 300 电泳仪(Bio-RAD,美国);7500 Real Time PCR System(Applied Biosystems,美国);细胞总RNA提取试剂盒 TRIZOL Reagent(Invitrogen,美国);SYBY Premix Ex TaqTM(Perfect Real Time)、TaKaRa PrimeScriptTMRT Reagent Kit(宝生物工程有限公司);SW-CJ-2D型超净工作台(苏州净化设备公司);XDS-1B型倒置相差显微镜(重庆光电设备厂);CO2孵箱(Shellab,美国)。
1.2 方法
1.2.1 牙周膜细胞原代培养
选取18~21岁志愿者因正畸减数而拔除的前磨牙,用含庆大霉素的PBS浸泡3~5 min后……
