植物中酪氨酸酶的筛选及不同抑制剂对其活性的影响
2012-11-02韦庆益袁尔东曾素滢宁正祥高建华
樊 倩,韦庆益,袁尔东,江 洪,曾素滢,宁正祥,*,高建华
(1.华南理工大学轻工与食品学院,广东广州510640; 2.华中农业大学理学院化学系,湖北武汉430700)
植物中酪氨酸酶的筛选及不同抑制剂对其活性的影响
樊 倩1,韦庆益1,袁尔东1,江 洪2,曾素滢1,宁正祥1,*,高建华1
(1.华南理工大学轻工与食品学院,广东广州510640; 2.华中农业大学理学院化学系,湖北武汉430700)
以新鲜马铃薯、红富士苹果、红蛇果、秀珍菇和紫茄子为研究对象,从中分别提取酪氨酸酶并测定其酶活力,发现紫茄子中提取的酪氨酸酶具有最大酶活力。因此选紫茄子中提取的酪氨酸酶做进一步研究。选邻苯二酚作为茄子酪氨酸酶底物,进一步研究了有机类、无机类和天然类三大类抑制剂对酪氨酸酶催化活性的影响,并测定了这些抑制剂的IC50值。
酪氨酸酶,提取,抑制剂
1 材料与方法
1.1 材料与设备
新鲜土豆、红富士、红蛇果、秀珍菇、紫茄子 当地市场;牛血清蛋白 Roche公司;肉桂酰甘氨酸甲酯(a1)、肉桂酰甘氨酸乙酯(a2)、肉桂酰甘氨酸丙酯(a3)、肉桂酰甘氨酸正丁酯(a4)、肉桂酰苯丙氨酸乙酯(b1)、阿魏酰苯丙氨酸乙酯(b2) 本实验室按照文献[6]合成;二氢杨梅素、芦丁 陕西慧科植物开发有限公司;焦磷酸钠、亚硫酸氢钠 分析纯;邻苯二酚 南京化学试剂有限公司;DMSO 广州化学试剂厂;其余实验室常用试剂 均为分析纯。
低温离心机 德国HETTICH公司;UV-1901紫外可见分光光度计 北京普析公司;其余为实验室常规器材。
1.2 实验方法
1.2.1 酪氨酸酶的提取 取植物材料25g按1∶2 (W/V)比例与冷的0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液(含20mmol/L抗坏血酸)混合,植物组织匀浆器匀浆2~3min,纱布过滤,滤液以 6500r/min低温离心10min,弃去沉淀得粗酶提取液。……
