孙克刚 施建国 蒋宇丹

（上海禾丰制药有限公司 上海 201206）

盐酸异丙肾上腺素注射液和盐酸肾上腺素注射液，主要成份分别为盐酸异丙肾上腺素和盐酸肾上腺素。两者均为肾上腺素类受体激动剂，使心脏收缩力增强，心率加快，骨骼肌血管、支气管平滑肌舒张。临床上做为抢救药，用于治疗心源性或感染性休克、心搏骤停等。盐酸异丙肾上腺素注射液[1]和盐酸肾上腺素注射液[2]均为《中国药典》2010年版二部收载品种，均采用高效液相色谱法进行含量测定及有关物质检查，但色谱条件不同，为将两个品种的检验方法进行统一，以方便生产检验，本文在中国药典提供的色谱系统的基础上进行优化，建立了同一种色谱条件测定盐酸异丙肾上腺素注射液和盐酸肾上腺素注射液的含量与有关物质。

1 仪器与试药

美国Agilent 1100高效液相色谱仪，VWD紫外检测器，Sartorius CPA225 D电子天平。盐酸异丙肾上腺素(山东科源制药有限公司)；肾上腺素(武汉武药制药有限公司)；盐酸异丙肾上腺素注射液(规格：2 ml∶1 mg)和盐酸肾上腺素注射液(规格：1 ml∶1 mg)由本公司提供。乙腈、甲醇、庚烷磺酸钠为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 盐酸异丙肾上腺素注射液的溶液制备

1)供试品溶液的制备。精密量取盐酸异丙肾上腺素注射液适量，加0.1%焦亚硫酸钠溶液制成20 µg·ml-1的溶液。

2)对照品溶液的制备。精密称取盐酸异丙肾上腺素对照品适量，加0.1%焦亚硫酸钠溶液溶解并定量稀释制成 20 µg·ml-1的溶液。

3)对照溶液的制备。精密量取盐酸异丙肾上腺素注射液1 ml，置100 ml量瓶中，加0.1%焦亚硫酸钠溶液稀释至刻度，摇匀。

2.2 盐酸肾上腺素注射液的溶液制备

1)供试品溶液的制备。精密量取盐酸肾上腺素注射液适量，加4%醋酸溶液制成0.12 mg·ml-1的溶液。

2) 对照品溶液的制备。精密称取肾上腺素对照品适量，加4%醋酸溶液溶解并定量稀释制成0.12 mg·ml-1的溶液。

3)对照溶液的制备。精密称取重酒石酸去甲肾上腺素对照品12 mg，置10 ml量瓶中，加流动相溶解至刻度，摇匀，精密量取1 ml，置100 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成12 µg·ml-1去甲肾上腺素的溶液。精密量取5 ml，置50 ml量瓶中，精密加入供试品溶液5 ml，用流动相稀释至刻度，摇匀。

2.3 空白辅料溶液的制备

称取焦亚硫酸钠适量，用4%醋酸溶液溶解并稀释制成0.2 mg/ml焦亚硫酸钠的溶液。

2.4 色谱条件

色谱柱：Welch Materials C18色谱柱 (4.6 mm×150 mm，5 µm)；流动相：甲醇-乙腈-庚烷磺酸钠溶液（取庚烷磺酸钠1.76 g，加水溶解并稀释至800 ml，摇匀）（1∶1∶ 8）。检测波长：280 nm；流速：2.0 ml/min；柱温：30 ℃。

2.5 系统适用性试验

取重酒石酸去甲肾上腺素对照品10 mg，加0.1 mol/L盐酸5 ml使溶解，取1 ml，加30%过氧化氢溶液0.1 ml，摇匀，在紫外光灯（254 nm）下照射90 min，加流动相9 ml，摇匀，作为系统适用性试验溶液[3]。取系统适用性试验溶液20 µl，注入液相色谱仪，除主成分峰外，应有相对保留时间1.2和1.5的两个降解峰，主峰及两个降解产物之间的分离度均应符合要求。理论板数按去甲肾上腺素峰计算不低于2 000（图1）。

图1 系统适用性试验溶液色谱图

2.6 专属性试验

分别取空白辅料溶液及两种注射液的供试品溶液、对照品溶液各20 µl，进样，结果表明空白辅料不干扰盐酸异丙肾上腺素和盐酸肾上腺素的含量测定（图2、图3）。

图2 盐酸异丙肾上腺素注射液辅料、对照品溶液与供试品溶液色谱图

2.7 线性关系及范围

分别精密称取盐酸异丙肾上腺素适量，按“2.1 2)”配 制 成 10、16、20、24、32、40 µg·ml-1的 溶 液， 各取20 µl，按“2.4”项下测定，记录色谱图。以盐酸异丙肾上腺素峰面积(X)对其质量浓度(Y，mg·ml-1)进行回归，得盐酸异丙肾上腺素回归方程为：Y=5.935×103X-21.50，r=0.999 9。结果表明盐酸异丙肾上腺素在10～40 µg·ml-1范围内与峰面积线性关系良好。

图3 盐酸肾上腺素注射液辅料、对照品溶液与供试品溶液色谱图

分别精密称取肾上腺素适量，按“2.2 2)”配制成60、96、120、144、192、240 µg·ml-1的溶液，各取 20 µl，按 “2.4”项下测定，记录色谱图。以盐酸肾上腺素峰面积(X)对其质量浓度(Y，mg·ml-1)进行回归，得盐酸肾上腺素注射液回归方程为：Y=1.142×104X+26.56，r=0.999 6。结果表明肾上腺素在60～240 μg·ml-1范围内与峰面积线性关系良好。

2.8 检测限的考察

按信噪比3∶1测得盐酸异丙肾上腺素和盐酸肾上腺素最小检测限为 40.66 ng·ml-1和 44.12 ng·ml-1。

2.9 精密度试验

配制供试品溶液共6份，分别进样20 µl，盐酸异丙肾上腺素注射液标示量RSD值为0.44%，盐酸肾上腺素注射液标示量RSD值为0.09%。

2.10 回收试验

按处方量的80%、100%、120%并分别按“2.1”和“2.2”配制16、20、24 µg·ml-1的盐酸异丙肾上腺素溶液和96、120、144 µg·ml-1盐酸肾上腺素溶液，各取 20 µl，按“2.4”项下方法测定，计算得盐酸异丙肾上腺素的平均回收率为100.5%，RSD值为0.76%(n=9)；盐酸肾上腺素的平均回收率为100.2%，RSD值为0.60%(n=9)。

2.11 含量测定

取对照品溶液、供试品溶液各20 µl，按照“2.4”项下方法测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。将盐酸异丙肾上腺素注射液三批和盐酸肾上腺素注射液三批含量测定结果分别与《中国药典》2010年版方法比较，差异不大(表1、2)。

表1 盐酸异丙肾上腺素注射液三批含量测定结果

表2 盐酸肾上腺素注射液三批含量测定结果

2.12 有关物质的检查

精密吸取空白辅料溶液、对照溶液、盐酸异丙肾上腺素注射液各100 µl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰（扣除相对保留时间为0.07之前的辅料峰和溶剂峰），与辅料峰相邻的最大色谱峰不得大于对照溶液主峰（盐酸异丙肾上腺素）面积的10倍（10.0%）；其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍（1.5%），其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的2倍（2.0%）(表3、图4)。

表3 盐酸异丙肾上腺素注射液三批有关物质测定结果

图4 盐酸异丙肾上腺素注射液有关物质色谱图

精密吸取空白辅料溶液、供试品溶液、对照溶液各20 µl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。供试品溶液的色谱图中如有与去甲肾上腺素峰保留时间一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，不得过肾上腺素标示量的1.0%。如有其他杂质峰，扣除焦亚硫酸钠峰、醋酸峰及之前的辅料峰，与辅料峰相邻的最大色谱峰不得大于对照溶液中肾上腺素峰的峰面积(10%)，及其他各杂质峰面积之和不得大于对照溶液中肾上腺素峰面积的0.1倍(1.0%)(表4、图5)。

表4 盐酸肾上腺素注射液三批有关物质测定结果

图5 盐酸肾上腺素注射液有关物质色谱图

2.13 盐酸异丙肾上腺素与盐酸肾上腺素的同时测定

分别取盐酸异丙肾上腺素注射与盐酸肾上腺素注射液供试品溶液5 ml和1 ml，混匀，进样20 µl，结果发现盐酸异丙肾上腺素与盐酸肾上腺素两峰分离效果良好（图 6）。

图6 盐酸异丙肾上腺素注射液与盐酸肾上腺素注射液主峰分离色谱图

3 讨论

经实验比较，本法与药典法无差异，但本法同时适用于盐酸异丙肾上腺素注射液、盐酸肾上腺素注射液的含量测定和有关物质检查，方便生产上对肾上腺素类产品的同时检验。

参考《中国药典》2010年版二部中盐酸异丙肾上腺素注射液的流动相：庚烷磺酸钠溶液-甲醇（80∶20）（用1 mol/L磷酸调节pH值至3.0），为使流动相同时适用于盐酸异丙肾上腺素和盐酸肾上腺素，对流动相的比例进行调整，发现流动相比例为甲醇-乙腈-庚烷磺酸钠溶液（1∶1∶8）时，主成分峰与杂质峰的分离情况最好，故选用其为流动相。紫外扫描图显示盐酸异丙肾上腺素和肾上腺素均在280 nm波长有最大吸收，因此选择280 nm波长作为检测波长。美国药典[4]记载盐酸肾上腺素注射液含量测定采用的色谱柱长度为150 mm，流速采用2.0 ml/min，经试验用柱长为250 mm的色谱柱，主峰出峰都较晚，为25 min之后，故选择采用150 mm长度的色谱柱，流速采用2.0 ml/min。

盐酸异丙肾上腺素与盐酸肾上腺素分子结构中均具有儿茶酚（邻苯二酚）结构，性质不稳定，接触空气或受日光照射，极易被氧化变质，故制成注射液需加入焦亚硫酸钠作为抗氧剂。但焦亚硫酸与邻苯二酚易生成磺化物，虽可通过本文所研究的色谱方法对该磺化物进行分析，但还须对该磺化物生成过程进一步研究确认，且在有必要时应进行相关的药理毒理研究。

盐酸异丙肾上腺素注射液和盐酸肾上腺素注射液，光照、高温破坏后降解产物较少，酸、碱、氧化破坏后均产生大量降解产物。但主成分与降解产物的分离度均符合要求，不干扰盐酸异丙肾上腺素注射液和盐酸肾上腺素注射液含量及有关物质测定。

[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典：2010 年版（二部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：701-702.

[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典：2010 年版（二部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：460.

[3] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典：2010 年版（二部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010： 571-572.

[4] The United States Pharmacopeial Convention .USP34-NF29[M]. Rockcille：The United States Pharmacopeial Convention，2011：2701.