张 冲，刘 祥，陈计峦

(1.石河子大学食品学院，新疆石河子 832000;

2.国家加工食品质量监督检验中心，天津 300384)

实时荧光定量RT-PCR监测沙门氏菌活菌

张 冲1，刘 祥2，*，陈计峦1

(1.石河子大学食品学院，新疆石河子 832000;

2.国家加工食品质量监督检验中心，天津 300384)

沙门氏菌是引起食物中毒的最常见致病菌，而基于DNA水平的常规PCR(DNA－PCR)检测法虽然快速、灵敏，但在检测时无法区分死活菌，死亡的细菌会出现假阳性结果，严重影响日常检测结果的判断。提取沙门氏菌总RNA之后，采用一步法逆转录聚合酶链式反应(RT－PCR)，以沙门氏菌invA mRNA为检测对象，发现只有活的沙门氏菌显阳性，死亡的沙门氏菌呈阴性。而且RT－PCR法的稳定性良好，能够准确定量活的沙门氏菌，在纯培养时，检出限可达1CFU/3mL。实验表明，建立的RT－PCR法是一种能够快速、精确检测沙门氏菌活菌的方法。

沙门氏菌，RT－PCR，死活菌，常规PCR

沙门氏菌是食品中最常见的致病菌，大量存在于牛肉、猪肉、鸡蛋、牛奶、海鲜等多种食物中，能引发多种沙门氏疾病，中、轻度感染会有腹泻、呕吐、腹部绞痛、发烧等症状产生［1］。在欧盟委员会、美、英、法、日等多个国际权威机构和国家发布的食品微生物限量标准中，对肉、蛋、奶类等动物性产品沙门氏菌的规定均为不得检出，在所有微生物限量的标准中限制最为严格［2］。传统培养检测法，操作复杂繁琐、耗时费力，完成整个检测过程至少需要5d的时间［3］;而目前在食品微生物检测中广泛运用的定量PCR技术，大多是基于DNA水平的(DNA－PCR)，虽然快速、特异性强、灵敏度高，但由于细菌死亡后，DNA降解缓慢，能够稳定存在，容易产生假阳性结果［4］。……