许庆金，邓志瑞，张文举，陈 沁

(上海大学生命科学学院，上海200444)

牛奶过敏原PCR检测方法的建立

许庆金，邓志瑞，张文举，陈 沁*

(上海大学生命科学学院，上海200444)

牛奶是主要的食品过敏原之一，其中β－乳球蛋白是引起牛奶过敏的主要成分。基于牛奶β－乳球蛋白基因序列设计一对PCR引物，经过反应条件的优化，建立了适合检测牛奶β－乳球蛋白过敏原的PCR方法。实验结果表明，当PCR反应体系中模板DNA量为25ng，引物浓度为4mmol/L时，检测效果最佳。所建立的方法不仅可用于不同保质期、不同来源牛奶β－乳球蛋白过敏原的测定，亦可用于牛、羊奶不同比例混合物中β－乳球蛋白过敏原的检测。

β－乳球蛋白，PCR，牛奶过敏原

食物过敏(food allergy)是食物刺激有机体产生的变态反应［1］，微小的剂量即可在几分钟之内引起皮肤以及肠道等的疾病，严重者甚至导致休克死亡。发达国家每年有超过20%的人受过敏性疾病的困扰。联合国粮食及农业组织(FAO，995)报告的八类主要的过敏原食物是牛奶、鸡蛋、鱼、甲壳类(虾、蟹)、大豆、花生、核果类(杏、板栗、腰果)以及小麦。牛奶是其中最常见的过敏原之一，在小于3岁的婴幼儿中发病率为1.6%～2.8%［2］。而β－乳球蛋白是牛奶致敏的主要成分［3］。牛奶过敏已引起社会的关注，日本、澳洲和西方国家要求含有牛奶成分的食品必须标明牛奶过敏标示［4－5］。目前，牛奶过敏原的检测方法主要有基于蛋白质检测的SDS－PAGE、HPLC和HPLC－MS等［6－7］。这些方法本可直接检测到过敏原蛋白，但在食品加工过程中，蛋白质空间构象易被破坏，从而影响检测准确性，目前已有研究证实变性后的部分蛋白可与抗体结合引起假阳性［8－9］;此外，上述方法存在检测周期较长、不稳定因素多、工作量大等缺点［10］。……