刘 永，胡文君，蔡家利，王英杰

1.第三军医大学西南医院感染病研究所，重庆 400038;2.重庆理工大学药学与生物工程学院

目前研究表明，间充质干细胞(MSCs)可分泌多种细胞因子，能够促进肝细胞增殖及肝脏血管再生［1］，因此国内不少单位已将其用于肝硬化和肝衰竭的临床治疗。实验研究同时发现，移植共培养的MSCs-肝细胞可抑制急性肝衰竭的肝细胞凋亡，降低炎症因子水平，改善肝生化指标，提示MSCs联合肝细胞移植治疗肝衰竭可能更有临床价值［2］。迄今为止，有关MSCs与肝细胞的相互作用及其共同治疗肝衰竭的具体作用机制尚不十分清楚。本研究采用共培养策略和体外研究方法，观察了MSCs-肝细胞共培养上清对L02细胞增殖和活力的影响及L02细胞损伤的保护作用，旨在为MSCs联合肝细胞治疗肝衰竭提供新的实验依据。

1 材料与方法

1.1 MSCs、肝细胞的分离与共培养 实验动物SPF级SD大鼠(4～6周龄，购于第三军医大学实验动物中心)。采用全骨髓贴壁筛选法分离MSCs，传至第3代备用。采用体外胶原酶两步灌注法分离肝细胞，用台盼蓝染色计数测活力，接种于6孔板，待肝细胞完全贴壁后换液。与此同时，胰酶消化第3代MSCs，计数并以1∶10的比例加入肝细胞培养板，共培养6 d。每日收集共培养上清，同时收集单独培养的肝细胞、MSCs上清作为对照，采用500×g离心10 min和滤膜过滤的方法除去死细胞及杂质，－20℃保存备用。

1.2 L02细胞的培养及细胞损伤模型的建立 常规方法复苏L02细胞(本实验室保存购置于上海细胞所)，采用1640加10%的新生牛血清进行常规培养。……