陈 雷，王利娜，姜慧卿

1.河北医科大学第二医院消化内科，河北 石家庄 050000;2.河北省消化病实验室;3.河北省消化病研究所;4.河北省人民医院消化内科

肝硬化是一种全身性疾病，HPS是肝硬化晚期严重并发症之一，其发病机制尚不清楚［1］。一氧化碳(carbon monoxide，CO)是一个潜在的血管舒张因子，而HO-1是合成内源性CO的关键酶。本研究采用CBDL大鼠制备HPS动物模型，观察HO-1在肺组织的表达，探讨其在HPS发病机制中的作用。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和仪器 HO-1多克隆抗体及HRP标记的山羊抗兔IgG购自北京中山生物技术公司，RTPCR扩增系统购自美国Promega公司。

1.2 实验方法

1.2.1 动物模型的制备及取材:成年健康雄性Sprague Dawley大鼠共18只，体质量350～400 g，清洁级，由河北医科大学实验动物中心提供(DK0410-0054)。动物饲养1周后，随机分为3组:假手术组(sham operation，sham)、2周组和5周组，每组6只。3% 戊巴比妥钠按0.1mL/100g体质量腹腔麻醉，sham组大鼠沿腹白线开腹后，分离胆总管，不结扎即关腹;2周组及5周组组用4号丝线分别在近肝门处和近十二指肠端双线结扎胆总管后，从中段剪断胆总管，术后2周及5周处理动物，用预先充盈肝素的1 mL注射器经腹主动脉抽血1 mL后，立即在血气分析仪上进行检测。取肝组织部分置40 g/L甲醛中固定，石蜡包埋，连续3 μm切片，行病理及免疫组化检测，部分于液氮中保存，以备提取mRNA和蛋白质。

1.2.2 肝脏及肺脏组织学观察:将甲醛固定好的肝脏、肺脏组织用石蜡包埋、切片，常规HE染色、MASSON染色，光镜下观察病理变化。

1.2.3 HO-1免疫组化染色:取肺组织以中性甲醛固定，石蜡包埋后切片常规脱蜡至水，胰酶修复抗原后依次滴加HO-1多克隆抗体、HRP标记的山羊抗兔IgG二抗、过氧化物酶标记的链霉亲和素，以DAB显色剂进行显色反应，二甲苯透明，中性树脂封片。……