张岳灿，翟娜娜

1)宁波天一职业技术学院人体形态学教研室 宁波 315104

2)黄河科技学院人体解剖学与组织胚胎学教研室 郑州 450052

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是指小分子双链RNA转录后沉默靶基因的表达。siRNA主要通过特异地与序列互补的mRNA结合，并促进其降解，从而在细胞内发挥基因抑制的作用，最终使靶向基因表达下调。RNAi因其可以高效、特异地抑制靶基因的表达而迅速成为一种非常有效的在真核细胞中研究基因功能的工具，目前已经广泛地应用于基因功能鉴定、基因表达转录后调控等热门研究领域，同时也为多种疾病特别是肿瘤的基因治疗提供了新的思路[1]。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)是一种重要的信号转导分子，其在感受营养信号、调节细胞生长与增殖中起着关键作用[2]。近年来研究[3-7]发现，mTOR 途径在肿瘤细胞生长的调节中发挥重要作用，mTOR信号通路调节异常与包括乳癌在内的多种肿瘤的形成、细胞恶性转化相关，已成为肿瘤治疗的新靶点。作者设计了靶向mTOR的 siRNA，并观察其对人乳癌 MCF-7细胞mTOR蛋白及mRNA表达的沉默作用。

1 材料与方法

1.1 材料 MCF-7细胞系由河南省医药科学研究所王庆端研究员惠赠;RPMI 1640培养基购自美国HyClone公司;T7 RiboMAXTMExpress RNAi System、SA-AP、BCIP/NBT购自美国 Promega公司;LipofectamineTM2000脂质体购自上海杰美基因医药科技有限公司;mTOR鼠抗人多克隆抗体购自美国SAB公司;siRNA模板及5’端生物素标记mTOR cDNA探针(5’-CTCAGCGGTAAAAGTGTCCCCTGCCA-3’)由北京奥科生物技术有限责任公司合成;免疫细胞化学染色SP试剂盒、胃蛋白酶、预杂交液购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.2 靶向……