孟永亮 孙彦 罗小玲

研究发现，蒽醌类药物对许多实体肿瘤显示出良好的疗效[1-3]。但此类药物由于诱发肿瘤耐药的特性及对细胞的毒副作用使其临床上的应用受到限制[4]。其中，阿霉素仍然是研究蒽醌类抗肿瘤药物作用机理及观察蒽醌类药物临床疗效的代表性药物，它可抑制RNA 和DNA的合成，对RNA的抑制作用最强，抗瘤谱较广[5,7-8]，有研究表明，阿霉素作为蒽醌类药物的代表，它可诱导含端粒重复序列的核苷酸形成分子内G4结构，抑制端粒的延伸反应，还可保护端粒重复序列中鸟嘌呤免遭甲基化[5-6]。

1 材料和方法

1.1 材料 大肠癌SW480细胞系购自上海细胞库；盐酸阿霉素（上海佳伦生物科技有限公司，批号922008）；端粒酶活性检测试剂盒（德国Roche公司）；MTT（AMRESCO）；L15培养基（美国Gibco公司）；新生小牛血清（杭州四季青生物工程材料公司）；二甲基亚砜（美国Sigma公司）；其它常规试剂和仪器（广西医科大学肿瘤学国家重点实验室，山东万杰医学院生物工程省级重点实验室）。

1.2 主要仪器 CO2培养箱（Heal Force）；荧光显微镜（奥林巴斯）；倒置显微镜（奥林巴斯）；PCR扩增仪（bio-rad）全自动酶标仪（美国SHELLAB）。

1.3 细胞培养 饱和湿度条件下的细胞培养箱中常规传代培养sw480细胞，传代比例1:3。

1.4 细胞毒性测定 取对数生长期的sw480细胞制成2×104细胞悬液，取100μl接种于96孔培养皿内,使阿霉素浓度分别达到2.5、5.0、10、20μmol/l,培养24、48、72、96h后，每孔加入MTT液20ul，再培养4h，去上清，加入二甲基亚砜。在酶联免疫检测仪上，测定490nm处的光密度吸收值，计算不同浓度阿霉素对SW480细胞的增殖抑制率。实验重复三次，计算平均值。……