王雪英

鼻咽癌(NPC)在我国的发病率较高，多发于我国南方。而Espstein-barr病毒属于疱疹病毒科ɣ亚科，已有研究发现EB病毒与鼻咽癌发病密切相关[1],鼻咽癌患者EB病毒感染率明显高于健康人群。过去常常利用检测EB病毒的相关抗体来对鼻咽癌患者实施诊断及对病情变化检测，但这种方法特异性和敏感性较差。随着PCR技术的不断发展，使直接对EBV定量检测在临床中得以实现，且已被广泛使用。因此，本研究为探讨定量检测血浆EBV-DNA在鼻咽癌诊治中的临床意义，现将具体情况报告如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2011年1月～2011年12月在经我院病理检查初诊为鼻咽癌患者320例，其中男180例，女140例；年龄最大71岁，最小24岁，平均44.2岁；病理类型：泡状核癌30例，中分化鳞癌75例，低分化鳞癌215例。健康体检者290例,男155例,女135例,平均年龄39.4(26～63)。标本采集:分别抽取3组受检者外周血2ml,加入EDTA抗凝管,4000r／min离心,然后吸取上层血浆于-20℃保存待测。

1.2 研究方法 采用荧光定量PCR法血浆检测EBVDNA含量。实时荧光定量PCR仪为德国Roche公司生产的LightCyclerⅡ,标本严格按中山大学达安基因股份有限公司生产的EB病毒(EBV)核酸扩增(PCR)荧光检测试剂盒说明书进行操作,荧光定量PCR反应体系包括：PCR缓冲50μl，上下游引物和探针各10pmol，dNTP、dCTP、dGTP、dUrP各200pmol／L,Taq聚合酶5μl模板5μl。双标记荧光探针序列5′-(FAM)CTGTCT GTAAAGTCCAGCCTCC(TAMRA)-3′,每批PCR均用双蒸水作阴性对照；克隆合成的EB病毒DNA片段作为阳性对照，并稀释成不同浓度梯度进行PCR扩增。先将荧光定量PCR扩增仪在93℃3min预变性，然后接93℃45s，55℃2min，40个循环，反应结束，用计算机将样本和标准曲线对比计算。

1.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件包对所有数据进行处理，用χ2检验比较计数资料，以均数±标准差（x±s）表示评分数据，采用t检验对计量资料进行组间显著性测试，将P≤0.05定为检验水准。……