张 坤 姜妙娜 张彩华 贾玉杰

肝星状细胞（Hepatic stellate cells，HSCs）的活化是肝纤维化的中心环节[1]，对HSCs的活化进行干预是临床治疗肝纤维化的发展方向[2]。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）是近年来发现的一种进化上保守的蛋白激酶，参与多种病理和生理过程，与细胞的生长、分化、增殖、迁移等过程密切相关[3]。研究表明，在实验性大鼠肝纤维化模型中应用mTOR抑制剂，可降低肝纤维化程度[4]，说明mTOR在肝纤维化的发生发展中发挥一定的作用。核糖体S6激酶（P70S6K）是mTOR的直接作用底物，被mTOR磷酸化后激活，从而控制含5'-TOP结构的mRNA的翻译[5]。研究表明，P70S6K参与了HSC表达胶原的调控，因而与肝纤维化的发生关系密切[6]。但到目前为止，国内外有关mTOR/P70S6K信号通路与肝纤维化发生关系的研究甚少。

关于中药在分子水平包括信号转导等方面的研究还很少。实验证明肝复康对肝纤维化具有预防及治疗作用[7～10]。我们通过体外培养大鼠肝星状细胞-T6（Hepatic stellate cell-T6，HSC-T6），以肝复康进行干预，进一步探讨其抗肝纤维化的作用机制。

材料与方法

一、细胞培养 HSC-T6细胞株由上海中医药大学许列明教授惠赠。细胞复苏后接种于含10%胎牛血清、100U/ml青霉素、100U/ml链霉素的高糖DMEM培养基中，37℃，5%CO2孵箱中培养。

二、含药血清的制备[11]健康SD大鼠，雌雄不限，体重300～350g，被随机分为正常对照组和肝复康治疗组，每组10只，分别给予生理盐水、肝复康（4.16ml/只）灌胃，每天一次，共七天。最后一次灌胃前禁食12小时并在灌胃后一小时腹腔注射苯巴比妥钠麻醉，经腹主动脉采血，4℃、3000rpm离心20分钟，取血清，过滤，56℃灭活30分钟后分装，-80℃保存。……