董长征， 董秀芳， 赵文清， 张素芳， 李文玲

药物难治性癫痫目前仍是临床上治疗的难题，神经肽Y(neuropeptide，NPY)基因治疗癫痫逐渐成为国内外研究的热点［1］，NPY全名神经肽酪氨酸，是由36个氨基酸组成的多肽。作为广泛分布于中枢神经系统的神经递质，NPY被认为具有调节神经元兴奋性的作用。在前期研究中我们已经证实了将NPY基因通过腺相关病毒载体转移至大鼠海马内实现过表达，4w后可以减轻致痫大鼠的发作程度［2］。但是NPY抑制癫痫发作的细胞分子学机制仍不十分清楚。

本研究应用全细胞膜片钳技术，记录原代培养的大鼠海马神经元的自发兴奋性突触后电流(spontaneous excitatory postsynaptic currents，sEPSCs)，分析NPY对海马神经元突触电活动的影响，探讨NPY调控癫痫发作的细胞分子学机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 新生24h Wistar大鼠若干只，由英国利兹大学生物系实验动物中心提供。

1.1.2 主要试剂及设备 Neurobasal TM、胎牛血清(FBS)、胰蛋白酶(Trypsin)、L-多聚赖氨酸、N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸购自GIBCO公司，氯化镁(MgC12、6H2O)分析纯购买自英国Fisher Scientific公司。AxonClamp 200B放大器、数转换器(Digidata 1320A 16-bit Aequisition System)、BPS-8灌流控制系统均购自美国Axon公司;Olympus CK2倒置显微镜购自日本的Olympus公司。

1.2 方法

1.2.1 大鼠海马神经元原代培养 首先75%乙醇消毒，快速断头取脑，在解剖显微镜辅助下，无菌分离大鼠双侧海马组织，放置于冰浴的解剖液中，然后用0.125%的胰蛋白酶37℃培养箱消化15min，加入NM5培养基，中和胰酶终止消化。用手动单道可调式移液器轻轻吹打组织块15次(不超过20次)，制作成单细胞悬液。用计数板进行细胞计数，用细胞培养液将细胞数调整为2～5×105/m l，然后将细胞分别接种于细胞培养皿中。……