秦 勇 陈念平 叶冠雄 徐胜前 吴成军 王 世 潘德标

胆汁酸可通过诱导内质网(ER)中Ca2+的释放和(或)钙内流，改变细胞内钙离子浓度(［Ca2+］cyt)，来加强或抑制胆汁沿着胆道系统进行排泄，调节肝细胞一系列生理功能［1～3］。我国中药柴胡在临床应用中发挥不同的作用，柴胡皂苷是柴胡的主要化学成分，Yang等研究发现10μmol/L柴胡皂苷(I)能诱导大鼠胰腺腺泡细胞内钙库中Ca2+释放，增加细胞内Ca2+浓度，随后又出现胞外Ca2+内流，再次增加胞内Ca2+浓度［4～6］。而在随后的研究中证实，柴胡皂苷(I)通过与大鼠胰腺腺泡细胞膜受体的相互作用转导刺激信号，使［Ca2+］i先后两次达到峰值，从而持续加强柴胡皂苷(I)的促酶分泌功能。日本学者Kodama等［7］对C6型大鼠神经胶质瘤细胞的研究中发现10～100μmol/L柴胡皂苷－d可诱导细胞内钙库中Ca2+释放，使细胞内Ca2+浓度升高。综合上述学者的研究，柴胡皂苷－d可调控细胞内Ca2+浓度的变化，但能否诱导肝细胞系内Ca2+浓度的变化在国内少见报道，本实验在细胞水平上探讨SS－D对H4－ⅡE细胞内Ca2+浓度变化影响作用。

资料与方法

1．细胞株:大鼠肝癌细胞株H4－ⅡE购自上海拜力生物科技有限公司。

2．试剂和仪器:DMEM培养基(广州威佳公司)，石胆酸、熊脱氧胆酸(Sigma公司)，柴胡皂苷－d(南昌贝塔公司)，Fluo－3/AM荧光探针(香港先进技术公司)。

3．细胞培养:大鼠肝癌细胞株H4－ⅡE接种于含10%胎牛血清、100U/L青霉素、100μg/ml链霉素的DMEM高糖培养基中，在37℃、饱和湿度、5%CO2培养箱中常规培养，每1～2天换液传代培养。传代时将原培养液吸出，加入0．25%胰蛋白酶溶液消化45s后，加入5ml左右的新培养液终止消化，然后用培养液吹打制成细胞悬液后传代或接种。……