樊志明，黄超红，郑宏莹，贺鸿桂

(解放军第422医院肿瘤科，广东湛江524009)

ERCC-1和COX-2在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

樊志明，黄超红，郑宏莹，贺鸿桂

(解放军第422医院肿瘤科，广东湛江524009)

目的探讨ERCC-1和COX-2在非小细胞肺癌中的表达水平，分析两者与非小细胞肺癌患者预后的相关性。方法采用免疫组织化学法检测96例非小细胞肺癌组织中的ERCC-1和COX-2表达水平，分析两者与临床病理参数间的相关性。结果ERCC-1与NSCLC的病理相关性分析显示，病理类型、TNM分期及预后与ERCC-1的阳性表达密切相关(P＜0.05)。COX-2与NSCLC的病理相关性分析显示，病理类型、分化程度与COX-2的阳性表达密切相关(P＜0.05)。ERCC-1蛋白表达与COX-2蛋白表达的相关性分析显示ERCC-1和COX-2蛋白表达不相关。结论COX-2蛋白及ERCC-1在NSCLC中均有不同程度的表达，检测COX-2及ERCC-1表达对NSCLC预后的判断具有一定价值。

ERCC-1；COX-2；非小细胞肺癌

肺癌是最常见的肺原发性恶性肿瘤，其发病率及死亡率均居全球各类肿瘤的首位，肺癌患者5年生存率低于15.7%[1]，其中非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer，NSCLC)占肺癌发病率的80%[2]。环氧合酶-2(Cyclooxygnase-2，COX-2)是一种过度表达可促进肿瘤细胞增殖的诱导酶。DNA切除修复交叉互补基因-1(Excision repair cross-complementation group 1，ERCC-1)为DNA修复密切相关的基因，多数作者认为其与肿瘤分化密切相关。有关ERCC-1和COX-2表达在非小细胞肺癌中的临床意义并不清楚，为此，本文着重探讨ERCC-1和COX-2在非小细胞肺癌组织中的表达及相关性，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料收集我院2004年6月至2008年 12月行手术治疗的非小细胞肺癌(NSCLC)患者96例，其中男63例，女33例。年龄37～81岁，平均(58.2±8.9)岁。病理类型中腺癌56例，鳞癌29例，粘液表皮癌5例，腺鳞癌6例。分化程度中低分化55例，高分化41例。所有患者术前均给予放疗、化疗以及免疫治疗，术后随访36个月。

1.2 方法肿瘤组织标本于术后收集，石蜡包埋后制成蜡块，4µm切片后行SP法免疫组织化学染色。石蜡切片脱蜡至水后磷酸盐缓冲液(PBS)液洗两次，每次5 min。高压锅抗原修复后PBS液洗两次，每次5 min。滴加血清封闭液20 min，甩去多余液体分别滴加ERCC-1(福州迈新公司)、COX-2一抗(北京中杉金桥生物技术有限公司)，放置1 h后PBS洗3次，每次2 min。滴加试剂SABC 20 min，PBS洗4次，每次5 min。DAB试剂盒显色，蒸馏水清洗后采用苏木素复染，酒精分化、脱水、透明、封片并镜检。

1.3 评估方法根据染色细胞比例及染色强度对ERCC-1和COX-2表达进行分析，其中ERCC-1和COX-2染色中细胞核染色呈棕黄色显示阳性，细胞核无着色或者细胞浆无着色显示阴性。在阳性表达较为集中的切片中选取5个高倍镜视野，每视野计数200个细胞，取平均数，其中＜5%：0分，5%～30%：1分，31%～70%：2分，≥71%：3分。着色强度中，阴性：0分；弱阳性：1分；阳性：2分；强阳性：3分。两组数据相乘，其中0～1分为(-)，1～2分为(+)，3～4分为(++)，5分以上为(+++)。

1.4 统计学处理数据采用SPSS13.0统计学软件分析，计量资料采用t检验；计数资料比较采用χ2检验；等级资料比较采用Kruskal-Wallis H检验，两者之间的相关性采用Pearson检验，其中P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各指标中ERCC-1与NSCLC病理特征相关性病理类型、TNM分期及预后与ERCC-1的阳性表达密切相关(P＜0.05)。腺癌患者(++～+++)程度表达39.3%，鳞癌表达17.2%，两组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。预后≤3年患者(++～+++)程度表达15.4%，预后＞3年患者表达为40.4%，两组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。TNM分期方面，Ⅰ～Ⅱ期患者(++～+++)程度表达40.0%，Ⅲ～Ⅳ期表达13.9%，两组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。具体见表1。

表1 各指标中ERCC-1与NSCLC病理特征相关性(例)

2.2 各指标中COX-2与NSCLC病理特征相关性病理类型、分化程度与COX-2的阳性表达密切相关(P＜0.05)。腺癌患者(++～+++)程度表达64.3%，鳞癌表达37.9%，两组比较差异有统计学意义(P＜ 0.05)。分化程度中，高分化肺癌患者(++～+++)程度表达为43.9%，中低分化表达为60.0%，两组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，具体见表2。

组别分类例数P值性别男女＞0.05年龄＞0.05病理类型＜0.05分化程度＜0.05预后＞0.05 TNM分期≤60岁＞60岁鳞癌腺癌高分化中低分化≤3年＞3年Ⅰ～Ⅱ期Ⅲ～Ⅳ期＞0.05淋巴结转移有无63 33 54 42 29 56 41 55 39 57 60 36 44 52 COX-2 -～+(n=45) 29 16 26 19 18 20 23 22 17 28 26 19 20 25 ++～+++、(n=51) 34 17 28 23 11 36 18 33 22 29 34 17 24 27＞0.05

2.3 ERCC-1和COX-2蛋白表达的相关性非小细胞肺癌中的ERCC-1蛋白表达与COX-2蛋白表达进行配对卡方检验(χ2＝2.683，P=0.132)，显示两组蛋白表达不存在相关性。具体见表3。

表3 ERCC-1和COX-2蛋白表达的相关性分析(例)

3 讨论

肺癌是恶性肿瘤患者死亡的主因，我国肺癌的发病率及死亡率占据恶性肿瘤的首位。肺癌根据生物学行为不同分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌，其中非小细胞肺癌占80%左右。肺癌患者生存率较低、预后相对较差，因此，我们需对肺癌具体机制进行深入研究，以期提高肺癌患者诊断率及治愈率。COX是催化花生四烯酸转移成为内源性前列腺素中的关键性限速酶，包括结构型COX-1和诱生型COX-2两种亚型，正常情况下COX-2在多数正常组织中不表达或者呈低表达，而在几乎所有的肿瘤组织中均可表达COX-2[3]，其主要通过对肿瘤细胞增殖、分化，抑制肿瘤细胞凋亡及促进肿瘤血管生成等，在肿瘤发生、发展、侵袭、转移等多个过程中均起着较为重要的作用[4-5]。Cianchi等[6]研究中显示，COX-2在结直肠癌肿瘤上皮细胞中呈现阳性表达，而正常结肠上皮中呈阴性表达。王鲁建等[7]研究表明COX-2在NSCLC中呈现过度表达，其表达水平与NSCLC的侵袭、淋巴结转移以及临床分期密切相关。本组研究表明，腺癌患者(++～+++)程度表达64.3%，鳞癌表达37.9%，两组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。分化程度比较中显示，高分化肺癌患者(++～+++)程度表达43.9%，中低分化表达60.0%，两组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。研究结果表明COX-2表达阳性程度高的NSCLC患者主要表现为腺癌及分化程度相对较低，COX-2表达表达与NSCLC患者的预后呈一定关系。

ERCC-1位于19号染色体中，是核苷酸剪切修复家族中具有特异性的重要成员之一，其为编码297个氨基酸的蛋白，在DNA单链受损处5’端进行剪切后发挥作用，ERCC1的表达具有防止肿瘤的发生、发展的作用[8]。ERCC-1在NSCLC组织中表达意义因不同肿瘤的临床分期以及化疗与否具有不同的相关性。研究表明，ERCC-1阳性患者的生存期显著高于阴性表达患者，而晚期接受化疗的NSCLC患者中，ERCC-1的高表达患者生存期相对短于低表达的患者[9-10]。而本组研究结果表明，腺癌患者(++～+++)程度表达39.3%，鳞癌表达17.2%，腺癌患者ERCC-1阳性表达显著高于鳞癌。在生存期分析中，预后≤3年患者(++～+++)程度表达15.4%，预后＞3年患者表达40.3%，两组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。研究结果表明ERCC-1高表达与非小细胞肺癌患者预后密切相关，阳性表达高患者生存期显著提高。在TNM分期比较方面，Ⅰ～Ⅱ期患者(++～+++)程度表达40.0%，Ⅲ～Ⅳ期表达13.9%，两组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。结果显示，ERCC-1阳性表达患者TNM分期分期较低，表明ERCC-1阳性表达高的患者分期较好、患者预后较佳。而在相关性研究方面，ERCC-1蛋白表达与COX-2蛋白表达的配对卡方检验结果(χ2=2.683，P=0.132)表明ERCC-1和COX-2蛋白表达不相关，显示两组蛋白表达不存在相关性。

综上所述，笔者认为COX-2蛋白及ERCC-1在NSCLC中均有不同程度的表达，检测COX-2及ERCC-1表达对NSCLC预后的判断具有一定价值。

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Expression of ERCC-1 and COX-2 in non-small cell lung cancer and their clinical significance.

FAN Zhi-ming, HUANG Chao-hong,ZHENG Hong-ying,HE Hong-gui.The 422thHospital of PLA,Zhanjiang 524009,Guangdong, CHINA

ObjectiveTo investigate the expression of ERCC-1 and COX-2 in non-small cell lung cancer (NSCLC),and to analyze their correlation with the prognosis of NSCLC.MethodsImmunohistochemistry methods were used to detect the expression levels of ERCC-1 and COX-2 in 96 patients of NSCLC.The correlation between the expression of the two proteins and the clinical pathology were analyzed.ResultsThe pathologic correlation analysis between ERCC-1 and NSCLC revealed that the pathological types,TNM staging and the prognosis were related closely with the positive expression of ERCC-1 protein(P＜0.05).The pathologic correlation analysis between COX-2 and NSCLC showed that the pathological types and differentiation degree were related closely with the positive expression of COX-2 protein,P＜0.05.No correlation was found between the expression of ERCC-1 protein and COX-2 protein.ConclusionCOX-2 and ERCC-1 proteins have different degree of expression in NSCLC.Detecting the expression levels of COX-2 and ERCC-1 is of certain value in the prognosis of NSCLC.

ERCC-1;COX-2;Non-small cell lung cancer

R734.2

A

1003—6350(2012)12—001—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.12.001

2012-02-11)

樊志明(1971—)，男，湖北省咸宁市人，主治医师，学士。