邢爱英 刘忠泉 刘洋 贾红彦 李自慧 郑晓静 曹廷明 杜凤娇 杜博平 古淑香 张宗德

近几年来，全球TB患者有不断增加的趋势，我国TB发病率居世界第二。耐药结核病、流动人口罹患TB、Mtb和HIV的双重感染者的增加以及BCG对成年人保护作用的不佳（0%～70%）［1］使得我国结核病的预防控制工作进一步加剧。结核疫苗的研制一直是结核预防控制工作方面的一大主要措施。笔者在克隆、表达复苏因子（resuscitation－promoting factor，Rpf）蛋白质的基础上，应用5个复苏因子蛋白质疫苗免疫BALB／c小鼠后，用Mtb标准株H37Rv感染BALB／c小鼠，发现复苏因子D、E有很高的免疫原性［2－3］。因此，笔者构建了 Mtb Rpf D、Rpf E－DNA疫苗，探讨 Rpf D及 Rpf E－DNA疫苗对感染Mtb的BALB／c小鼠的免疫特性。

材料和方法

一、材料

SPF级BALB／c型小鼠（4周龄）购至自北京维通利华实验动物技术有限公司；H37Rv标准株为本室保存；Glas－col吸入暴露系统为 Glas－col公司产品；佐剂阳离子聚合物购自厦门太阳马生物工程有限公司；IFN－γ、IL－2、IL－12 检测试剂盒购自美国R＆D公司；淋巴细胞增殖试剂（Cell Counting Kit CCK－8）购自美国罗氏公司；非放射性细胞毒性检测试剂盒购自美国Promega公司；兔抗小鼠抗血清抗体购自Sigma公司；His Bind Purification Kit（融合标签蛋白纯化试剂盒）购自美国Novagen公司。

二、方法

1．Rpf D、Rpf E－DNA质粒疫苗的构建和表达：具体方法参考文献［4］。

2．转染质粒制备：按照梭华Sofast基因转染试剂盒操作说明书制备。

3．免疫动物：180只SPF级4周龄BALB／c雌性小鼠，平均分为6组。即空质粒组、Rpf D质粒组、Rpf E质粒组、BCG组、生理盐水组、空白对照组。空质粒组、Rpf D质粒组、Rpf E质粒组和生理盐水组分别背部皮下接种空质粒转染质粒、Rpf D－DNA转染质粒、Rpf E－DNA转染质粒、生理盐水各200μl；而空白对照组不免疫。……