黄慧雅，苏震，薛向阳，谢媚媚，余业成

（温州医学院，浙江 温州 325000，1.附属第一医院 肾内科；2.微生物学与免疫学教研室；3.仁济学院 临床医学系）

肾间质纤维化是各种肾脏疾病发展到终末期肾衰的公共通路。肾脏纤维化牵涉到细胞外基质（extracellular matrixc，ECM）的过度沉积和上皮间质细胞转分化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）过程。

microRNA（简称miRNA）是近年来新发现的长22个核苷酸的内源性非编码单链小RNA分子，主要作用是抑制基因表达，在转录水平上保证基因表达的准确性。研究表明miRNAs能抑制三分之一以上的人类基因[1]。miRNAs在心脏[2-3]、肺[4]、肝脏[5]、皮肤[6-7]中作为组织纤维化的调节因子，在肾脏纤维化中，miRNAs通过转化生长因子（transforming growth factor-β，TGF-β）信号通路来调节肾小管上皮细胞转分化[8-9]。目前已有研究报道在肝脏、心脏、肺、皮肤纤维化过程中，miR-29c表达均下调[2，5-6，10-11]。我们的前期研究通过建立单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型及5/6大鼠肾大部切除模型，发现随肾组织纤维化的进展，miR-29c表达逐渐下调。

本研究中我们采用TGF-β1诱导肾间质成纤维细胞转分化，观察miR-29c及胶原I（Col I）表达变化，通过脂质体转染的方式使miR-29c过表达，检测转染的miR-29c对ECM的影响。

1 材料和方法

1.1 材料 大鼠肾间质成纤维细胞株（NRK-49F，美国模式培养物集存库），含10%胎牛血清（FBS）的DMEM/F12培养基（GIBICO公司，美国），转染试剂LipofectamineTM2000 Reagent（Invitrogen公司，美国），TGF-β1（R&D公司，美国），小鼠抗大鼠α-SMA单克隆抗体（Abcam公司，美国），兔抗大鼠Col I单克隆抗体（Merk公司，德国），小鼠抗大鼠β-actin单克隆抗体（Santa Cruz公司，美国），山羊抗小鼠IgG（Abcam公司，美国），山羊抗兔IgG（Santa Cruz公司，美国），Trizol reagent（Invitrogen公司，美国）。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养及TGF-β1诱导转分化：大鼠NRK-49F细胞用含10% FBS的DMEM/F12培养液，置于5%CO2、37 ℃培养箱内培养，以1:3传代。……