张 珍，刘春会，杜镇镇，王 冬

微小隐孢子虫感染引起的隐孢子虫病（Cryptosporidiosis）是一种全球性以腹泻为主要症状的人兽共患寄生虫病。筛选出免疫原性较强的基因片段，用于此病的免疫诊断、预防与治疗，是防治此病的主要手段之一［1］。有学者研究表明，微小隐孢子虫CP23基因编码的蛋白是宿主免疫识别的主要蛋白，能够刺激机体产生强烈的免疫反应；CP15/60、CP15等也以其较强的免疫原性，有望成为免疫诊断、免疫预防与治疗的靶抗原［2］。本课题前期研究中成功构建了重组表达质粒p ET－30a－23和p ET－30a－15/60－23复合基因载体，诱导表达了大量的重组蛋白 CP23 和 CP15/60－23［3］。为进一步观察重组蛋白CP23、CP15/60－23的免疫原性，将其配以免疫佐剂免疫小鼠，分别检测小鼠的体液和细胞免疫功能及抗隐孢子虫的感染能力，从而为人类隐孢子虫多价亚单位疫苗的研用提供基础。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 BALB/c小鼠60只，雌雄各半，SPF级，体重14～16g，购于山东大学医学院实验动物中心。

1.1.2 主要试剂与仪器 重组蛋白CP23和CP15/60－23由本实验室构建、表达和纯化；1640培养液（上海克隆生物高技术公司）；小牛血清（上海复旦天呈公司）；碱性磷酸酶（AP）标记的羊抗鼠IgG结合物及兔抗大鼠IgG结合物；小鼠IFN－γ、IL－12检测试剂盒均为晶美生物工程公司产品；MK3型酶标仪（芬兰Labsystems公司）；FC500型流式细胞仪（美国Beckman Coulter公司）。

1.2 方法

1.2.1 动物免疫 BALB/c小鼠60只，随机分为3组，每组20只。分别为磷酸缓冲液（PBS）对照组、重组蛋白CP23免疫组、重组蛋白CP15/60－23免疫组。每只小鼠背部皮下多点注射弗氏完全佐剂和抗原混合物共100μL/只，对照组注射同量佐剂与PBS的混合物。……