李文娟，张 亮1，，邓 婧1，，金 戈1，，黄荣忠1，，房 亮，谢 鹏1，

2.重庆医科大学神经科学研究中心，重庆市神经生物学重点实验室，重庆 400016；

博尔纳病毒（Borna disease virus，BDV）属于单分子负链RNA病毒目博尔纳病毒科博尔纳病毒属，1994年Briese等和Cubitt B等分别对Giessen株和V株BDV基因组测序，发现其共有8910bp［1－2］。BDV 基因组有 6 个主 要 开 放 读 码 框（Open reading frame，ORF），分别编码核蛋白（N，p40）、磷蛋白（P，p24）、基质蛋白（M，gpl8）、糖蛋白（G，gp94）、RNA 聚合酶 （L）和非糖基化的特殊蛋白 （X）［3］。研究发现p24和p40为BDV的两种重要结构蛋白，在感染宿主细胞与组织中高度表达，通常作为BDV检测的主要标志，在病毒致病中亦发挥重要作用［4－5］。BDV 感染宿主广泛，几乎能感染所有温血动物，且为严格嗜神经病毒，能持续感染动物中枢神经系统。星形胶质细胞是中枢神经系统中含量丰富的一种神经胶质细胞，生理功能广泛，对维持中枢神经系统内环境的稳定有重要作用。BDV能感染神经元并侵袭其周围的星形胶质细胞，势必引起星形胶质细胞功能紊乱，从而导致宿主神经功能障碍。因此，阐明BDV及病毒蛋白与星形胶质细胞的相互关系及作用机制对于理解BDV感染所导致的神经病理及神经生物学改变有重要意义。本实验选择含有GFAP启动子的星形胶质细胞特异性表达载体，分别制备了p24和p40重组质粒，为后续研究p24和p40单个病毒蛋白在BDV致病中的作用及与星形胶质细胞相互作用机制提供工具。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器与试剂 PCR 仪（BIO－RAD PTC－200 DNA Engine cycler），凝胶成像系统（ChemiDocTM，Bio－Rad），恒温培养振荡器（ZHWY－103B，上海智城），分光光度仪（NanoDrop 1000，Thermo），离心机（Heraeus FrescoTM21，Thermo），CO2培养箱（SERIES II，Thermo），超净工作台（SW－CJ－1D，苏州净化），电……