苦参碱对小鼠坐骨神经损伤后脊髓运动神经元的影响
2012-08-20王永安刘浩宇尹维田
中国实验诊断学 2012年1期
曹 剑,王永安,魏 壮,刘浩宇,尹维田
(1.赤峰市医院,内蒙古 赤峰024000;2.吉林大学中日联谊医院)
本文对坐骨神经损伤BALB/c小鼠应用苦参碱,通过对坐骨神经相应脊髓节段gap-43的测定和神经LFB染色的观察,探讨苦参碱对周围神经损伤后的修复和再生方面的作用。
1 材料与方法
1.1 实验动物和分组
健康成年雄性BALB/c小鼠160只(体重25±2g,由吉林大学基础医学院实验动物中心提供)单侧坐骨神经离断后,常温饲养,普通饮食,自由饮水。随机分为生理盐水空白对照组、高剂量给药组、中剂量给药组和低剂量给药组,其中实验组动物又根据术后存活时间随机分为12h,24h,3d,5d、7d、2 w,4w,8w组,以上各组每组10只动物。
1.2 动物模型制备
坐骨神经损伤模型的制作:BALB/c小鼠经1%硫喷妥钠100mg/kg腹腔麻醉,俯卧位固定,无菌条件下单侧下肢股后部纵切口约2cm,梨状肌下暴露坐骨神经,用玻璃分针钝性小心分离坐骨神经主干和周围组织,在坐骨结节下0.5cm处完全离断坐骨神经,以11/0显微缝线12倍显微镜下吻合坐骨神经,分层缝合肌肉和皮肤。
1.3 给药方法和剂量
采取灌胃方法给药。参照临床应用苦参碱原药剂量,等效换算为腹腔注射用剂量[1],将此数值作为给药的中等剂量,并以等比数列量确定高低剂量组用量。最终各组给药量为,高剂量组10mg/kg/d,中剂量组5mg/kg/d,低剂量组2.5mg/kg/d,取相应剂苦参碱以生理盐水溶解后腹腔注射。对照组给予同等体积生理盐水。连续给药至处死。
1.5 取材及标本制备
取每组动物5只分别在相应的时间点用1%硫喷妥钠100mg/kg腹腔麻醉后,采用脊柱后方正中切口咬骨钳咬开椎管,切取损伤侧L4-L6段的脊髓,标记后迅速浸置于液氮中备用。……
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