邱心如，周洪澜，李亚娟，张丽红，翟颖仙，王医术＊

（1.吉林大学a.药学院2009级；b.第一医院；c.病理生物学教育部重点实验室，吉林 长春130021；2.四平市中心人民医院）

唾液腺腺样囊性癌 （salivary adenoid cystic carcinoma，SACC）是最常见的唾液腺恶性肿瘤之一，大约占唾液腺恶性肿瘤的20%［1］。近年来，槲寄生Viscum Coloratum（Kom.）Nakai的抗癌作用受到国内外医药学界的极大重视。在亚洲，韩国对槲寄生抗癌作用的研究较多，他们主要提取槲寄生的外源凝集素（Lectins）作抗癌研究［2，3］。在我国，早在1994年王庆瑞等人就曾经报道，槲寄生的总生物碱具有较强的抗肿瘤作用，是槲寄生中有效的抗肿瘤成分之一［4］。Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用［5，6］。基于此，本实验主要研究槲寄生碱作用ACC细胞后，Caspase家族中关键因子Caspase8的表达情况。

1 材料和方法

1.1 材料

药物及试剂：槲寄生碱粉末由吉林大学基础医学院药化实验室制备；新生牛血清购于TBD公司；RPMI1640培养液、胰蛋白酶购于美国Gibco公司；5－氟尿嘧啶购自天津金耀氨基酸公司；ACC细胞购于中国科学院上海生命科学研究院。Caspases8多克隆抗体购于Cell Signaling公司。

1.2 方法

1.2.1 槲寄生碱的配制 根据文献采用稀盐酸浸提法［1］提取，用 NaOH 将pH 值调至6.5左右，制成槲寄生碱溶液，浓度为1mg／ml。

1.2.2 细胞培养 ACC细胞培养于含10%FCS的RPMI1640培养液中，培育在37℃、5%CO2培养箱内，达到对数生长期后，进行实验分组：①对照组：未用槲寄生碱处理的正常生长细胞；②阳性对照组：采用5-FU处理ACC细胞；③实验组：采用槲寄生碱（2.24μg／ml）处理 ACC细胞。

1.2.3 细胞爬片 加药后立即将细胞（5×104／ml）接种于已经铺好盖玻片的24孔板内，37℃、5%CO2培养24小时后0.1%PBS冲洗，10%中性福尔马林固定，于－20℃冷藏备用。……