王彦月，张 艳，秦新月，陈黎燕，曾 春

（重庆医科大学附属第一医院1.神经内科、重庆市神经病学重点实验室；2.放射科，重庆 400016）

实验性自身免疫性脑脊髓（experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）是多发性硬化的常用动物模型。国外采用Lewis大鼠［1］、C57BL／6J小鼠［2］等敏感品系制备模型。但在国内，常因以上动物或造模试剂价格昂贵、难以获得，而选用Wistar大鼠建立EAE模型。Wistar大鼠虽为非敏感品系，但其易获得，且造模成本相对低，故在国内运用较广。目前Wistar大鼠制备EAE存在成功率不稳定、制备方法不规范的缺陷［3－6］。本研究旨在探求制备该模型安全而有效的卡介苗浓度及改良注射方法，提高该模型成功率。

1 材料和方法

1.1 材料

豚鼠15只（重庆医科大学实验动物中心），体重380－450g。雌性Wistar大鼠108只（第三军医大学野战外科研究所实验动物中心），6－8周龄，体重160－190g，分为A、B组，A组60只分为A1－A5共5组，用于最佳卡介苗浓度的筛选；B组48只分为改良组、传统组、对照组1、对照组2共4组，用于观察不同注射方法对模型成功率的影响，均采用随机数字表法。

羊毛脂、石蜡油（重庆医科大学设备科）；卡介苗（bacilus calmette-guerin，BCG）和百日咳杆菌（bordetella pertussis vaccine，BPV）（石家庄伟天科学仪器设备有限公司）；CD11b／c等价抗体（Abcam），FITC标记的荧光二抗（武汉博士德），钆喷酸替酸葡甲胺（Gd-DPTA）（广州先灵）。磁共振（美国GE，1.5T），倒置相差显微镜（日本 Olympus）。

1.2 抗原的制备

羊毛脂和石蜡油按1：3配成不完全福氏佐剂（incomplete Freund＇adjuvant，IFA），消毒备用。临用前，将BCG加入IFA中，制成含BCG分别为1 mg／ml，5mg／ml，10mg／ml，15mg／ml，20mg／ml的完全福氏佐剂（complete Freund＇adjuvant，CFA）CFA1－CFA5。制备豚鼠全脊髓匀浆（spinal cords homogenate of guinea pig，GPSCH）［5］。将 GPSCH与等量的CFA混匀，冰上抽打成油包水型乳剂即得抗原。

1.3 模型的诱导

四足垫加尾跟部皮下注射抗原，0.5ml／只。……