吕殿红，魏文康，黄 忠，温肖会

(广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生公共实验室，广东广州510640)

(Guangdong Key Laboratory of Veterinary Public Health,Institute of Veterinary Medicine,Guangdong Academy of Agricultural Sciences,Guangzhou 510640,China)

在大肠杆菌(Escherichia coli)侵袭宿主组织引起发病的过程中，毒素、黏附素、外膜蛋白等毒力因子相互协调、发挥作用。耶尔森菌强毒力岛(High pathogenicity island，HPI)是细菌重要的致病因素，也是E.coli重要的毒力因子[1]，其中irp2为铁调节蛋白，为HPI的标志基因；fyuA为鼠疫菌素受体基因，具有鼠疫菌素和耶尔森菌素双重受体功能，irp2、tsh、iucD、iss基因均与细菌的铁调节、摄取有直接或间接的关系，而且在致病性E.coli上出现的频率较高[2-3]。本研究采用PCR方法对105株HPI+E.coli进行了4种毒力基因(fyuA、tsh、iucD、iss)的检测，对部分菌株的相关基因进行了克隆与序列分析，研究HPI+E.coli菌株中fyuA基因的出现几率，以及与其他毒力因子出现的频率，为进一步了解E.coli毒力因子流行状况提供实验依据。

1 材料和方法

1.1 菌株与质粒 PCR检测HPI毒力岛标志基因irp2基因阳性的E.coli105株[4]，包括80个禽源分离株和35个猪源分离株，均来自发病养殖场；宿主菌DH5α购自广州合达生物技术有限公司；pMD18-T载体购自宝生物工程(大连)有限公司。

1.2 主要试剂及酶 dNTP、ExTaqDNA聚合酶、DNA Marker等购买自宝生物工程(大连)有限公司。

1.3 引 物 5种毒力基因(irp2、fyuA、tsh、iucD、iss)的引物分别参考文献[4]～[6]设计，参考基因的序列登录号分别为 L18881、Z38065、AF218037、M18968和X52665，由上海英潍捷基生物有限公司合成，扩增的irp2、fyuA、tsh、iucD和iss基因片段分别是1 037 bp、948 bp、825 bp、714 bp和309 bp。

1.4E.coliDNA模板的制备 取单个菌落接种LB液体培养基，采用热裂解法分别制备菌株的DNA模板。

1.5 毒力基因的PCR检测及序列研究 检测105株HPI+菌中的fyuA、tsh、iucD、iss4种基因，分别按文献[4]～[7]中程序进行。对检……