吕南千，费 青，张麒云，楼国祥

骨肉瘤好发于青少年，恶性程度高、侵袭力强，极易发生血道转移[1]，早期肺部转移是患者死亡的主要原因。近年来，随着分子生物学技术的不断进步及其在肿瘤病因学的广泛应用，从分子水平研究骨肉瘤的形成机制，寻找有针对性的治疗措施以改善患者的预后，渐成骨肿瘤领域的研究热点。有研究结果显示，作为趋化因子CXCL12，即基质细胞衍生因子（stromal cell derived factor 1，SDF 1）的专属受体，CXCR4与其配体CXCL12相互作用可促使肿瘤细胞发生迁移、侵袭和转移[2]。有研究结果显示，包括卵巢癌、肺癌、黑色素瘤等在内的多种肿瘤均存在CXCR4的选择性高表达[3-4]。但是，CXCR4与骨肉瘤之间的关系目前尚未明确。为进一步深入探讨CXCR4与骨肉瘤发生、发展的关系，本研究在mRNA水平上检测多种人骨肉瘤细胞株CXCR4的表达情况，并将真核表达质粒pcDNA3/CXCR4通过脂质体转染到骨肉瘤细胞HOS-8603中，旨在观察pcDNA3/CXCR4的表达对人骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响。

1 材料与方法

1.1 材料与设备

人骨肉瘤细胞株HOS-8603、U2OS和MG-63由第二军医大学病理学教研室提供，培养于含10%胎牛血清的低糖DMEM培养液中。pcDNA3空白质粒和pcDNA3/CXCR4质粒由德国Marburg实验室Herbert Schwarz教授惠赠。穿膜小室（Transwell小室，周径24 mm、孔径8 μm）、重组细胞基底膜（Matrige 1，美国Costar公司）；新生牛血清（美国Hyclone公司）；脂质体转染试剂Lipofectamine 2000和Trizol试剂（美国Invitrogen公司）；反转录试剂盒（美国Fermentas公司）；rTaq酶、T4DNA连接酶、dNTPs及各种限制性内切酶（日本TaKaRa公司）；质粒小量抽提试剂盒及大量抽提试剂盒（德国Qiagen公司）；Real time PCR试剂（美国Gene公司）；DMSO和MTT（美国Amresco公司）。2550型酶联免疫检测仪和MRC 1024LCSM流式细胞仪（美国BIO-RAD公司）；……