宋 洁 孙 凯 张书捷 鲁 双 李翠萍 韩彦龙 卜晓波

(牡丹江医学院生物教研室，黑龙江 牡丹江 157000)

中国各地区高血压患病率总体上是北高南低，由东北向西南递减，且原发性高血压在不同民族中的发病率不同，提示遗传背景与高血压患病存在着一定的联系〔1〕。缓激肽(BK)是重要的血管活性物质之一，通过缓激肽β2受体(bradykinin receptorβ2，BKβ2R)介导发挥作用。朝鲜族人群高血压的发病率居全国56个民族前列，中国牡丹江地区为心血管疾病高发区并为朝鲜族人群聚居区。本研究以BKβ2R为候选基因，探讨其多态位点与朝鲜族原发性高血压的关系。

1 对象与方法

1.1 样本采集 高血压组取自2008～2011年于牡丹江市朝鲜民族医院内科就诊的原发性高血压患者，均为世居牡丹江的朝鲜族人群，三代血亲内无其他民族。符合1999年《WHO/ISH1999高血压指南》制定的高血压诊断标准〔2〕，且排除糖尿病、冠状动脉硬化性心脏病、肾衰竭和继发性高血压者。共纳入313例患者，年龄 (58.7±9.2)岁，血压145.9/100.7 mmHg。

正常对照组取自2008年于牡丹江市朝鲜民族医院门诊体检的健康人，无高血压病家族史，体格检查及常规化验未见异常，共纳入202名，年龄 (56，4±10.2)岁，血压115.3/77.1 mmHg。各组受试者均无血缘关系，均了解实验目的和内容，并自愿参加实验。

1.2 方法

1.2.1 外周血DNA的提取 取冻存乙二胺四乙酸 (EDTA)抗凝静脉血全血300 μl，用杭州博讯公司的DNA提取试剂盒提取基因组DNA，－20℃保存备用。参照Braun等〔3〕设计，委托上海生工生物工程公司合成引物，上游:5′－GCAGAGCTCAGCTGGAGGCG－3′， 下 游:5′－CCTCCTCGGAGCCCAGAAG－3′。PCR 反应体系为 25 μl，其中模板 DNA 50 ng(1 μl)，引物各10 pmol/L(各 1 μl)，2 × TaqMiX 12.5 μl:MgCl2终浓度为2 mmol/L、Taq酶0.6 U、dNTP为0.2 mmol/L，双蒸水9.5 μl，反应混合物混匀后瞬间离心，94℃预变性5 min，继之32个循环，每个周期94℃变性60 s，60.5℃退火45 s，72℃延伸60 s，末次循环后72℃延伸5 min。……