王 莹，李文媛，刘艳翠，丁 利，赵斯达

(牡丹江医学院解剖教研室，黑龙江牡丹江157011)

低氧诱导因子(hypoxia-inducible factors，HIF)是细胞低氧情况下调控基因表达的主要转录因子之一，主要包括HIF-1α和HIF-3α等亚基，是目前脑缺血缺氧性疾病基因治疗中的研究热点。HIF-1α和HIF-3α可通过促进血管形成、红细胞生成等途径使神经元细胞适应低氧微环境，对神经系统损伤具有保护作用［1］。神经干细胞(neural stem cell，NSCs)是具有自我更新和多向分化能力的细胞，具有易于在体外大量扩增、移植到神经系统后仍可增殖、免疫原性小、能够定向迁移等优点，被广泛应用于神经系统疾病治疗的研究。有文献报道［2］，NSCs移植能够改善脑缺血后的神经功能恢复，但具体作用机制还不清楚。本实验将通过观察NSCs对大鼠脑缺血损伤海马区HIF-1α和HIF-3α表达的影响，以探讨NSCs移植治疗脑缺血/再灌注损伤的可能机制。

1 材料和方法

1.1 动物、药品及试剂 雄性SD大鼠18只，清洁级，体质量280～320 g，购于中国医科大学实验动物中心(许可证号:SYXK［辽］2003-0013)。兔抗大鼠HIF-1α抗体、兔抗大鼠HIF-3α抗体、免疫组织化学SP试剂盒购于北京中山生物试剂公司。PKH-26试剂盒购于美国sigma公司。

1.2 NSCs培养及 PKH26标记 无菌条件下分离出SD大鼠海马组织，参照佟雷等［2］的方法进行分离培养，并换液传代，分离培养取第3～5代的 NSCs，制成单细胞悬液后，参照王莹［3］的方法进行PKH26标记NSCs。

1.3 动物分组与模型制备参照李文媛等［4］的线栓改良法复制大鼠大脑中动脉缺血模型，将18只大鼠随机分为三组:假手术组、模型组、NSCs组，各6只。建模成功后3 h分别经尾静脉注射等体积的生理盐水和已制备好的PKH26标记的同种异体 NSCs悬液(0.5 mL，4 ×106个/mL)，再灌注72 h后取脑，在视交叉后1～4 mm处冠状切面切开，取海马组织。……