冯 华，吴 丹，金晓明

(1.牡丹江医学院病理生理学教研室，黑龙江 牡丹江157011;2.黑龙江中医药大学附属第一医院病理科，哈尔滨150040;3.哈尔滨医科大学病理教研室，哈尔滨150081)

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是常见的恶性肿瘤，其发病率高，起病隐匿，临床缺乏有效的预防、检测及治疗手段，治愈率低下，在世界范围内，乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是HCC最重要的病因，HBV复制在肝炎、肝硬化、肝癌的发生和发展过程中，甚至肝癌的转移和复发阶段都可能起重要作用。最近许多研究表明，HBV基因型、病毒变异、HBV-DNA水平与HCC存在一定的关系，却还没有统一观点，甚至出现相反的结论。HBV致HCC的确切机制目前还不清楚。该项实验通过对人肝癌细胞系(HepG2，HepG2.2.15)中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)-2和MMP-9的表达情况的研究及对肿瘤细胞侵袭转移的影响来探讨HBV导致HCC的发生机制。

1 材料与方法

1.1 材料 人肝癌HepG2细胞购于中科院上海细胞库。人肝癌 HepG2.2.15细胞由复旦大学上海医学院医学分子病毒学重点实验室惠赠。细胞培养液DMEM(Dulbecco's modified eagle medium)由 Hyclone公司提供。胎牛血清由杭州四季青生物工程材料有限公司(HepG2细胞)及Gibco公司(HepG 2.2.15细胞)提供。明胶酶谱法所需试剂由Sigma公司提供。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 HepG2细胞和 HepG2.2.15细胞用含10%胎牛血清，100 mg/L青霉素和100 mg/L链霉素的DMEM培养液，其中HepG2.2.15培养液中加入250 mg/L的 G418;及 2 mmol/L谷氨酰胺，25 mmol/L4-羟乙基哌嗪乙磺酸溶液和1 mmol/L丙酮酸钠，细胞均于37℃，5%CO2孵箱中培养，培养液2～3 d更换一次，待细胞生长至80%左右时进行传代。HepG2.2.15细胞的培养要求符合二级生物安全标准，所有培养废液按照传染源处理。

1.2.2 细胞生长曲线测定 将两种细胞经胰酶消化后，细胞计数板计数，按照1×104细胞/孔接种于24孔板，次日起每天消化计数3个复孔，测定细胞数，取平均值，连续计数7 d。……