高文斌 郑真真 高 丰 韩传军 黄建辉 张晓晨 王武龙3 汪艾曼 王若雨 方今女

肺癌是世界范围内最常见的致死性肿瘤［1］。脑转移是肺癌治疗过程中面临的重大难题，不仅因其多发性，还因其严重影响患者的生存率和生活质量［2-3］。据统计，约15% ～20%的非小细胞肺癌(nonsmall cell lung cancer，NSCLC)在进展过程中会出现脑转移［4］。传统的脑转移治疗以放射治疗为主，随着化疗药物及化疗方案的不断改进，化疗在脑转移中的应用越来越广。拓扑替康(topotecan，TPT)是DNA拓扑异构酶Ⅰ类抑制剂，能抑制拓扑异构酶Ⅰ的活性而使得DNA断裂，抑制DNA的复制，杀伤肿瘤细胞［5］。基础研究表明TPT在血脑屏障通过率可以达到30%并对多种肿瘤具有作用［6-7］。本研究采用低剂量TPT作用于体外培养的耐顺铂肺腺癌细胞HTB-56/DDP，并进行观察，旨在探讨TPT治疗肺癌脑转移的机制。

材料与方法

一、实验材料

人耐顺铂肺腺癌细胞HTB-56/DDP，本实验室保存;拓扑替康是贵州汉方制药有限公司产品;Annexin V FITC Apoptosis Detection Kit、Z-IETD-FMK、Z-DEVD-FMK为BioVision公司的产品;DMEM购于Gibco公司，噻唑蓝购于sigma公司，小牛血清为四季青产品。

二、实验方法

1.细胞培养:人耐顺铂肺腺癌细胞HTB-56/DDP培养于青霉素105 IU/L、链霉素100 mg/L，37℃，5%CO2，饱和湿度条件下，含有10%小牛血清的DMEM培养基中。实验用的细胞均处于对数分裂期。

2.Caspase酶抑制剂对TPT作用实验分组:①对照组:空白对照;②TPT单药组(6.4μmol/L);③TPT与Z-IETD-FMK合用组;④TPT和DEVD-FMK合用组。至研究终点，倒置显微镜下观察形态后，应用MTT法酶联免疫分析仪测定其490 nm处吸光值。每个实验设5个副孔，实验重复3次。

3.Annexin-V FITC及PI双染测早期凋亡:对以上实验组处理8 h后，收集上述各组细胞0.25%胰酶消化，按照Annexin v-fict apoptosis detection kit说明书操作步骤，用流式细胞仪进行检测。……