李运成 刘 婷 贺斌峰 王关嵩

S100A4，又被称作Mts1，是S100蛋白家族的成员之一。研究发现S100至少包含25种蛋白，除了S100G以外，其他均为Ca2+结合蛋白。他们参与Ca2+信号传导，并通过钙离子信号传导途径作用于靶蛋白改变其活性，在细胞增殖、分化等过程中发挥重要作用。最近研究表明S100A4/Mts1基因不仅参与肿瘤的增殖、转移和侵袭，而且可促进肺动脉平滑肌(pulmonary arterial smooth muscle cells，PASMCs)的增殖、迁移，但其作用机制尚不明确［1-2］。本研究旨在对S100A4在低氧刺激肺动脉平滑肌增殖中的作用机制进行初步探讨。

材料与方法

一、主要试剂

SD大鼠由重庆市动物实验中心提供，胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)、低糖DMEM培养基、胰酶均购自美国GIBCO公司;p-JAK2(#9134)兔抗鼠单克隆抗体、p-STAT3(#38167)兔抗鼠单克隆抗体购于美国Scien Cell公司;S100A4(#ab27957)兔抗鼠单克隆抗体购于Abcam公司;辣根酶标记山羊抗兔IgG(H+L)购自北京华肽先锋生物公司(#40116);AG490购自武汉博士德公司;细胞裂解液、ECL化学发光试剂盒均购自PIERCE公司(#78503、#1856135);生物素标记山羊抗兔IgG(H+L)、DAPI购自江苏碧云天科技有限公司(#A0277、#C1005)

二、方法

1.大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells，PASMCs)细胞分离及培养:PASMCs从雄性SD大鼠肺动脉中分离得到，方法参照文献［3］。分离出的PASMCs在含10%的胎牛血清的低糖DMEM中于37℃、饱和湿度下5%CO2的培养箱中传代培养，取对数生长期的细胞进行实验。

2.大鼠PASMCs细胞的低氧刺激:取4瓶对数期生长、融合度95%以上的细胞，分为低氧组和干预组，吸出原有培养基，加入4 ml 0.1%FBS低糖DMEM培养基中常氧培养24 h，干预组在放入低氧环境前45 min加入30μM AG490(30μl)，低氧组加入等量生理盐水，这两组细胞放入在0.3%O2、5%CO2、94.7%N2低氧环境中分别培养0 h、8 h。

3.免疫荧光:用……